色谱与分离技术杂志
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毕赤酵母重组生产的三种辣根过氧化物酶同工酶的纯化策略比较

Rajamanickam V、Winkler M、Flotz P、Meyer L、Herwig C 和 Spadiut O

辣根过氧化物酶(HRP) 是一种多用途的含血红素糖蛋白，常用于医学诊断，主要从植物中分离出来。该过程涉及过滤、盐沉淀和几个色谱步骤，这些步骤成本昂贵、产量低并且产生同工酶混合物。虽然单一同工酶可以在毕赤酵母中重组产生，但它们在酵母中过度糖基化，导致下游过程繁琐，因此不具有竞争力。在本研究中，我们分析了纯化毕赤酵母中重组产生的三种 HRP 同工酶的 N-糖基化位点数量不同。我们想要 1) 确定蛋白质生产模式与最终产品质量和下游工艺之间的潜在相关性，2) 研究 HRP N-糖基化位点数量与纯化模式之间的相关性，以及 3) 找到最佳纯化方法重组生产 HRP 同工酶的策略。因此，我们应用了不同的培养策略，并使用颗粒树脂和整体支撑物测试了下游工艺。我们表明，培养方式会影响产品纯度，但不会影响后续的下游工艺。使用整体支持物对三种 HRP 同工酶中的每一种进行了成功的纯化，并且与 N-糖基化位点的数量无关，而通过基于颗粒的树脂进行的纯化则受到糖基化的严重影响。总而言之，我们证明了使用以流通模式操作的整体式纯化相对较小的物质的新颖可行性生物分子。