蛋白质组学与生物信息学杂志
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抽象的

具有改进的 dsDNA 不稳定特性的 IFI16-PAAD 突变体的设计和选择

Desmond Lau、Kush Dalal、Benjamin Hon 和 Frederic Pio

PAAD 死亡结构域是一个 6 螺旋束结构域，其中包含螺旋 3 中的无序区域。该结构域可以通过两种状态机制折叠，稳定性较低，并且可以经历不同的部分折叠构象。为了确定负责这些结构特征的特定氨基酸，我们将研究重点放在 IFI16 的 PAAD 结构域上，IFI16 是一种蛋白质传感器，可识别病毒核酸并触发（白细胞介素-β）响应感染的炎症反应。使用 GFP 定向进化对 IFI16-PAAD 进行随机突变，并通过圆二色性鉴定所得具有增加的二级结构和稳定性的突变体并测试核酸结合。几个含有 I46N/S 取代的 IFI16-PAAD-GFP 融合突变体转化为改进的二级结构和稳定性，并且观察到二级结构/稳定性增强与其破坏双链 DNA 稳定性的能力之间存在直接相关性。总之，GFP 定向进化可用于获得更具结构性和稳定的突变体并探测构象变化。这些数据表明，当病毒核酸与 IFI16 结合时，IFI16 的 PAAD 结构域构象发生变化，并且一定是病毒感染期间转导炎症反应的促成因素。