色谱与分离技术杂志
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开发超高性能液相色谱二极管阵列方法来定量人血浆中的伏立康唑

Yousra elmazahy*、Ahmed Farag、Lobna shalaby、Mohamed Nagy、

开发并验证了一种快速、选择性反相 (RP) 液相色谱-二极管阵列 (DAD) 方法，用于测定人血浆中的伏立康唑。由于超高效液相色谱 (UHPLC) 色谱的高通量和灵敏度，运行时间仅为 7.5 分钟，并且未使用缓冲液。添加200μl血清和200μl内标氟康唑。用 400 μl 甲醇简单沉淀蛋白质后，在 Agilent Zorbax Eclipse Plus® C18 色谱柱 (50*2.1 mm, 1.8 μm) 上分离出 10 μl 澄清上清液。柱温维持在40℃。使用甲醇和水的梯度洗脱，流速为0.4ml/min。氟康唑和伏立康唑的保留时间分别为 4.2 分钟和 6.2 分钟。使用波长为 261 nm 的二极管阵列检测器进行检测。该方法根据 FDA 生物分析方法验证行业指南进行了优化和验证。根据 ICH 指南，对理论塔板数、分辨率、拖尾和进样精度（保留时间和面积）进行系统适用性检查，以确保色谱系统的适用性和有效性。所开发的方法提供了出色的回收率、准确度、精密度、选择性、稳定性和重现性结果。校准曲线在 0.2-12 μg/ml 范围内呈线性，相关系数为 0.9997c，充分覆盖了适当药物监测的治疗范围。检测限和定量限分别为0.2 μg/ml 和0.5 μg/ml。日内准确度和精密度CV分别为91.2%-120%和0.8%-6.8%，日间准确度和精密度分别为92.6%-115%和2.5%-7.5%。伏立康唑的绝对回收率为 100% ± 15%。