糖类组学与脂质组学杂志
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国际标准期刊号: 2153-0637
国际标准期刊号: 2153-0637
安娜·伊丽莎·安德烈亚齐
肥胖是一种世界范围内的流行病，其特征是慢性正能量不平衡的多因素综合症。新生儿服用L-谷氨酸单钠 （MSG）会导致下丘脑弓状核损伤，导致啮齿动物成年后出现肥胖，其特征是儿茶酚胺在肾上腺髓质中积聚。氨基酸甘氨酸诱导肾上腺髓质分泌儿茶酚胺。因此，我们工作的目的是评估甘氨酸给药对大鼠味精肥胖模型的可能影响，并研究其对肾上腺儿茶酚胺髓质稳态的影响。雄性Wistar大鼠分娩后颈部皮下注射味精溶液（4mg/g体重）5天，对照组则注射生理盐水。动物也被分为两组，其中一组在21日断奶后接受添加甘氨酸（0.1g/Kg）的自来水 直到生命的 90 天。评估生物特征变量、内脏脂肪垫重量、肾上腺儿茶酚胺的总含量和基础分泌。甘氨酸增加了所有测试组的 Lee 指数，但对内脏肥胖没有影响。然而，甘氨酸处理完全重建了味精肥胖组的儿茶酚胺总含量和基础分泌。总之，虽然甘氨酸治疗显然完全重建了儿茶酚胺分泌稳态，但不足以直接显着减少大鼠味精肥胖模型中的内脏肥胖。肥胖是一种多因素综合征，其特征是慢性正能量不平衡。其发病率正以惊人的比例增加；目前，全世界约有 5 亿人肥胖，这是 2 型糖尿病和心血管疾病的危险因素。为了更好地了解这种疾病的复杂性，人们在医学研究上投入了大量的学术努力。L-谷氨酸钠 （ MSG）诱导的实验性肥胖模型已被广泛用于代表人类肥胖中观察到的代谢紊乱。新生儿给予味精会导致下丘脑弓状核损伤。 新生儿服用味精会导致啮齿动物成年后出现肥胖。此外，动物会出现脂肪异常沉积。此外，味精肥胖动物还存在高胰岛素血症、胰岛素抵抗以及由于分泌过程受损而在肾上腺髓质中儿茶酚胺积聚等特征。来自肾上腺髓质的儿茶酚胺在调节葡萄糖、脂质和蛋白质代谢中具有重要作用。交感肾上腺系统包括交感神经系统和肾上腺髓质的嗜铬细胞，肾上腺髓质将儿茶酚胺（主要是肾上腺素）分泌到血液中。嗜铬细胞受内脏神经的胆碱能支配；刺激该神经后释放的乙酰胆碱会激活嗜铬细胞中的神经元胆碱能受体，从而诱导膜去极化并引发儿茶酚胺分泌。肾上腺素的代谢作用导致血糖、脂肪分解、耗氧量和生热作用增加。因此，儿茶酚胺释放机制和/或产生的异常可能导致肥胖的发生。有文章表明，氨基酸甘氨酸可诱导肾上腺髓质分泌儿茶酚胺，但其在嗜铬细胞中的作用机制尚不清楚。Yadid 和合作者已经证明，肾上腺髓质的嗜铬细胞对甘氨酸的反应会优先释放肾上腺素。因此，我们工作的目的是评估甘氨酸对大鼠味精肥胖模型的可能影响，并研究其对肾上腺儿茶酚胺髓质稳态的影响。所有动物方案均根据巴西动物实验学院 (COBEA) 进行 23 和巴西联邦法及程序协议经动物处理伦理委员会 (UFJF – Juiz de Fora, Minas Gerais State, Brazil) 批准（许可证号：002/2012）。本研究使用雄性 Wistar 大鼠（所有实验程序 n=60）。这些动物来自茹伊斯德福拉联邦大学生殖生物学中心（CRB）。分娩后前 5 天，在动物颈部皮下注射味精溶液（4mg/g 体重） 7。对照动物接受等摩尔盐水溶液。动物的断奶在第21天进行。将动物分为四组：对照组和味精组，接受自来水；对照组和味精组，接受自来水；对照组和味精组，接受自来水。以及对照-甘氨酸和MSG-甘氨酸，其根据Alarcon-Aguilar等人24用添加甘氨酸(0.1g/Kg)的自来水处理 。断奶后，所有动物组每周称重。在整个方案期间，动物随意接受水和商业食物（Nuvital，库里蒂巴，巴西）并放置在环境受控的房间（23±3°C和12小时光/暗光循环（07:00-19:00 h））中。为了评估肥胖的发生，所有90日龄大鼠在戊巴比妥钠(45mg/100g体重腹膜内)麻醉下通过心脏穿刺放血而被安乐死。 去除附睾和腹膜后脂肪垫并称重，以估计味精治疗引起的肥胖。Lee指数由[体重（bw）1/3 （g）/鼻肛门长度（NAL）（cm）]×1000的比率计算，并用作MSG啮齿动物肥胖的预测因子。去除肾上腺并称重。在处理过程中，腺体保存在标准 Krebs-Hepes 溶液中，其组成为（以 mM 为单位）：Cl- 154.2；钠+ 144.0; 钙2+2.5；镁2+ 1.18；SO42-1.2；K+3.5；葡萄糖 11.1; Hepes(酸N-(2-羟甲基哌嗪)-N-(2-乙醇磺酸))25.0；牛血清白蛋白 (BSA) 0.5%，冰浴。所有实验组的右侧腺体均用于评估总儿茶酚胺含量（肾上腺素和去甲肾上腺素），通过三羟基吲哚荧光法进行定量 26。通过将值绘制在标准肾上腺素曲线的线性回归上获得结果。另一方面，左肾上腺用于分泌实验。使用立体透镜和眼科手术器械进行肾上腺髓质的解剖。此外，为了更好地操作，将分离的髓质用钢棒刺穿，并在标准 Krebs-Hepes 溶液中放置 40 分钟。使用Costar 96孔细胞培养板。每个孔含有 200 µL 标准 Krebs-HEPES 或含有 5 µM 甘氨酸的改良 Krebs-HEPES 溶液 27。儿茶酚胺分泌实验按照前述方法进行。所有结果均以平均值±SEM 表示。 p < 0.05 被认为具有统计显着性。使用适用于 Windows 的 GraphPad Prism 版本 5（GraphPad Software，美国加利福尼亚州圣地亚哥）进行单向方差分析与 Bonferroni 后测试。甘氨酸处理后对照动物的 NAL 增加了 3.5%（p<0.05）。然而，味精组之间的 NAL 没有差异。此外，甘氨酸处理增强了两组的 Lee 指数（p<0.001）。与对照动物相比，味精动物的肾上腺重量减轻，但在甘氨酸治疗后，当我们与它们各自的配对进行比较时，没有发现差异。