色谱与分离技术杂志
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二维电泳从水稻幼穗中提取蛋白质的六种方案的评价

黄霞，周华

抽象的

对于大多数报道的蛋白质组学方法，蛋白质提取和样品制备对于获得最佳结果至关重要。然而，由于蛋白质含量低和次生代谢物丰富，从农作物组织中提取蛋白质仍然是一个巨大的挑战，这些代谢物显着干扰等电聚焦和随后的蛋白质组分析。到目前为止，还没有尝试比较从水稻幼穗中提取蛋白质的方法。为了建立适用于水稻幼穗二维电泳 (2-DE) 的高效蛋白质提取方案，评估了六种蛋白质制备方案：(1)苯酚萃取；(2) Mg/Nonidet P-40 (NP-40)萃取；(3) Tris-碱/丙酮沉淀；(4) SDS提取；(5)三氯乙酸(TCA)/丙酮/苯酚萃取；(6)TCA/丙酮沉淀。该研究明确表明，与其他方法相比，TCA/丙酮/苯酚方法从水稻幼穗中提取蛋白质的效率更高，因为 1-DE 凝胶的质量更高，分辨良好的蛋白质斑点的最大数量（450 个） ，更高的分辨率和点丰度。此外，这些方法还产生了显着不同的二维凝胶电泳蛋白质斑点图案。通过 MALDI-TOF-MS/MS 分析鉴定了 30 种可见差异提取蛋白中的 29 种，并根据分子功能分为 8 类。积累的数据表明，由于每种方案的理化性质不同，不同的提取方法分别需要某些特殊的植物组织。总的来说，本文提出的这项研究将有助于为水稻幼穗（包括其他复杂的植物组织）的比较蛋白质组学分析提供基础。