色谱与分离技术杂志
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抽象的

单克隆抗体的二维液相色谱强制降解研究

An Y、Verma S、Chen Y、Yu S、Zhang Y、Kelner S、Mengisen S、Richardson D 和 Chen Z

由于存在多种酶促和化学修饰，例如脱酰胺、异构化、氧化、糖基化、糖基化、末端环化、聚集和断裂，单克隆抗体 (mAb) 产品具有极高的异质性。强制降解研究是评估 mAb 在极端条件（包括光照和极端局部 pH 值）下的潜在修饰和降解途径的常见做法。使用多种分析对降解的样品进行表征，包括针对电荷变体的离子交换色谱 (IEC) 和针对尺寸变体的尺寸排阻色谱 (SEC)。在这项概念验证研究中，二维液相色谱 (2D-LC) 方法成功应用于 mAb 强制降解样品，以评估 IEC 电荷分布中的尺寸分布。第一维 (1D) IEC 中的电荷变体峰值通过中心切割时间表进行分割，并且当之前的一维切割仍在进行二维 (2D) 分析时，集成的峰值停放功能可适应稍后洗脱的一维切割。因此，对于单次 IEC 进样，所有 IEC 分数均由 2D 采集以进行 SEC 分析。这项研究表明，2D SEC 与 1D IEC 兼容，可用于 2D-LC 分析。该方法的灵敏度足以确定每个单独 IEC 切割中的聚集体和碎片。计算出的受压 mAb-1 样品中的总聚集体和片段与一维 SEC 检测到的结果相当。最重要的是，2D IEC-SEC 方法能够以实时高效的方式桥接 mAb 电荷和尺寸变体。据观察，在 IEC 电荷分布中，聚集体在最基本的区域富集，特别是在高度降解的样品中。据作者所知，这是第一个用于完整抗体分析的 IEC-SEC 2D-LC 应用。