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慢病毒介导的脂肪干细胞中 NGF 的过度表达

阿克拉姆·阿里扎德、曼苏雷·苏莱曼尼、贾法尔·艾、阿里·法拉赫、赛义德·贾法尔·哈希米安、哈贾尔·埃斯蒂里、穆罕默德·礼萨·努拉尼和赛义德·纳赛尔·奥斯塔德

介绍：人类脂肪干细胞（ADSC）是多能干细胞，可以自我更新并分化为脂肪细胞、骨细胞和神经细胞等多种类型的细胞。这些干细胞可以通过微创技术大量分离。ADSC 是细胞治疗和再生医学的有用资源。神经生长因子（NGF）是第一个被发现并以其在神经发育中的抗凋亡作用为特征的神经营养因子。NGF可以促进神经元存活和神经突生长，还可以促进神经元分化和迁移。此外，研究表明，NGF可以保护轴突免受炎症损伤，改善受损大脑模型的认知功能，并在预防和治疗阿尔茨海默病等神经系统疾病中发挥作用。

方法和材料：采用消化法吸脂后从人体脂肪组织中提取ADSC。通过流式细胞术和在成脂和成骨差异培养基中的分化测定对 ADSC 进行表征。NGF 基因在巨细胞病毒 (CMV) 启动子下克隆到 pCDH-513B-1 (System Bioscience, Mountain View, CA, United States) 中。重组慢病毒是根据 Trono 教授实验室方案在 HEK 293T 细胞中进行一些修改而产生的。采用旋转染法转染ADSC。使用荧光显微镜追踪绿色荧光蛋白 (GFP) 标记、RT-PCR 和蛋白质印迹来测定 NGF 表达。

结果：提取的ADSCs具有间质形态，在分化培养基中分化为脂肪细胞和骨细胞。HEK293T 很容易用 pCDH-513B-1 转染，其中超过 99% 表达 GFP，因此我们从上清液中收集了假病毒。用这些假病毒转导的 ADSC 转移了 NGF，转导后表达 GFP，如荧光显微镜下所见。RT-PCR 和蛋白质印迹验证了其中 NGF 的过度表达。

结论：转NGF的假慢病毒可以转导ADSCs，导致NGF过度表达。