蛋白质组学与生物信息学杂志
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优化尿液处理方案以检测蛋白质和代谢物

Nazema Y Siddiqui、Laura G DuBois、Lisa St John-Williams、Will Thompson J、Carole Grenier、Emily Burke、Matthew O Fraser、Cindy L Amundsen 和 Susan K Murphy

背景：在尿液中，排尿时间和室温 (RT) 持续时间等因素可能会影响回收的蛋白质和代谢物数据的质量。添加剂可能有助于检测，但会增加样品收集或分析的复杂性。我们的目的是为临床获得的尿液样本确定最佳的尿液处理方案，以实现最高的蛋白质和代谢物产量，同时降解最小化。

方法：健康女性在同一天内提供多个尿液样本。女性们经历了第一次早上（凌晨 1 点）排尿和另一次“随机排尿”。随机空隙被等分：1)无添加剂；2)硼酸(BA)；3)蛋白酶抑制剂(PI)；或 4) BA + PI。在这些等分试样中，一些立即储存在 4°C 下，一些则在 RT 下放置 4 小时。对蛋白质和单个代谢物进行定量、标准化为肌酐浓度，并在不同的加工条件下进行比较。使用质谱分析对应于每个处理条件的样品池以评估蛋白质降解。

结果：10 名年龄在 35-65 岁之间的白人女性提供了配对的第一天早晨尿液样本和随机排泄的尿液样本。与随机“点”空白相比，标准化蛋白质浓度在上午 1 点略高。添加 BA 不会显着改变蛋白质，而 PI 显着提高标准化蛋白质浓度，无论样品是立即冷却还是在室温下放置 4 小时。在混合样品中，在我们测试的各种条件下，蛋白质降解的差异很小。在代谢物分析中，根据排空时间的不同，各个氨基酸存在显着差异。

结论：对于使用尿液的比较转化研究，应收集并标准化有关排尿时间的信息。对于当天处理的尿液样本，BA 似乎不是必需的，而添加 PI 可以提高蛋白质产量，无论 4°C 或 RT 储存温度如何。