色谱与分离技术杂志
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来自Cicer arietinum（鹰嘴豆）的半胱氨酸蛋白酶抑制剂样硫醇蛋白酶抑制剂的纯化和生化表征

Sheraz AB、Waseem FB、Aaliya S、Shahnawaz KM、Rizwan HK 和 Bilqees B*

胱抑素是硫醇蛋白酶抑制剂，普遍存在于许多植物和动物组织中。在本研究中，使用硫酸铵分级分离 (40-60%) 和 Sephacryl S-100 HR 柱上的凝胶过滤色谱法从鹰嘴豆中分离出类似硫醇蛋白酶抑制剂的半胱氨酸蛋白酶抑制剂，产率为 21.09%，纯化倍数为 78.89。通过 SDS-PAGE、动态光散射 (DLS) 及其凝胶过滤行为测定，其分子量约为 25.3 kDa。发现该抑制剂的碳水化合物含量非常低（0.34%），且巯基含量极少（1.45%）。CPC的斯托克斯半径、摩擦系数、扩散系数和沉降系数分别为4.299×10 ^-8 g/s、22.82 Å、12.68×10 ^-7 cm ² s ^-1和 2.64 S 分别。CPC 与硫醇蛋白酶（木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶）的动力学分析揭示了 CPC 的可逆和竞争性抑制模式，显示出对木瓜蛋白酶的最高抑制效率 (Ki=0.82 nM)，其次是无花果蛋白酶 (Ki=17.6 nM)，然后是菠萝蛋白酶（ Ki=41.3nM）。通过 CD 光谱评估，CPC 具有约 25.34% 的 α-螺旋含量。紫外可见光谱和荧光光谱表明，木瓜蛋白酶-CPC 复合物形成后，该复合物的一种或两种蛋白质发生显着的构象变化。