医学诊断方法杂志
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精子染色质结构测定 (SCSA) 的重新评估

金子悟、高松清

基于吖啶橙 (AO) 多色荧光的精子染色质结构测定 (SCSA) 被广泛用于观察人类精子核中的 DNA 损伤。为了重新评估SCSA的原理，制备了阴性DNA断裂率为87%的人活动精子作为阴性对照(NC)，并通过NC热变性制备阳性对照(PC)。根据显微镜、电泳和流式细胞术观察比较对照组的 AO 染色能力。通过 Percoll 密度梯度离心并随后向上游动来分离人类活动精子。然后，借助单细胞脉冲场凝胶电泳观察DNA片段化。

我们发现 AO 分子根据激发波长发出红色和绿色荧光。随着 AO 浓度的增加，两个对照的颜色都从绿色变为红色，并且在用胰蛋白酶进行凝胶内消化后缺乏红色荧光。NC 的颜色从红色变为绿色，并且 DNA 断裂在光漂白过程中同时进行。NC和PC的细胞图彼此相似。这些事实与 SCSA 原则相冲突。绿色和红色荧光分别是由于 AO 嵌入 DNA 和 AO 吸附到蛋白质上而发出的，它们的合并导致颜色变化。在光漂白过程中可能会观察到从红色到绿色的变色，因为插入的 AO 发出的绿色荧光比 AO 吸附到某些蛋白质上发出的红色荧光更能耐受活性氧。总体而言，SCSA 无法检测人类精子核中的 DNA 损伤。