医学诊断方法杂志
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使用没有和有终末期 DNA 断裂的纯化人类精子之间的比较研究重新验证精子染色质分散测试和彗星测定

金子悟*、高松清

目标：进行相互比较研究，重新验证精子染色质分散试验 (SCD) 和彗星测定 (CA) 的原理和定量性能。

方法：从正常精子精液中纯化不带或带终末期碎片颗粒碎片的人类精子，并用作自然发生的阴性和阳性对照（分别为NC和PC）。SCD和CA均用2.0 mol/L NaCl、1.0 mmol/L DTT提取核蛋白。SCD 确定 DNA 损伤与紫色光环的面积成反比。CA 通过电泳从颗粒碎片的数量估计 DNA 损伤的水平；所谓的彗尾，将它们的电泳特征与单细胞脉冲场凝胶电泳（SCPFGE）进行了比较。

结果： SCD 中的紫晕被确定为由附着在辐射 DNA 纤维上的结晶紫 (CV) 染色核蛋白组成。SCD无法区分NC和PC。残留的核蛋白阻碍了天然CA中DNA的迁移；相比之下，采用凝胶内胰蛋白酶消化的 SCPFGE 将纤维状和颗粒状片段排出到伸长的 DNA 纤维之外。碱性 CA 在 0.3 mol/L NaOH 中运行 DNA。尽管 DNA 被撕碎成颗粒状片段，但残留的核蛋白保留了与 DNA 的结合能力，并且仍然固定了新生成的片段。

结论： DNA 碎片分析需要测量分离的活动精子的早期碎片，缺乏蛋白水解会降低中性和碱性 CA 的定量性能。总体而言，结果表明 SCD 和 CA 作为收集临床统计数据的工具不够敏感。