临床与实验眼科学杂志
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氧诱导性视网膜病变 (OIR) 模型中视网膜血管识别的双重染色方法

徐凌、胡平、张晔、龙金一、吴雪、叶雨红、崔宁、孙飞、路新民、沉吉奎、大龙

目的：本研究的目的是改进一种省时、省钱、省力的方法来区分氧诱导视网膜病变 (OIR) 小鼠的视网膜结构血管、新生血管 (NV) 和无灌注 (NP) 区域。

方法： C57BL/6J 小鼠从出生后第 7 天 (P7) 至 P12 暴露于高氧环境 (75% ± 2% O ₂ )，然后放回室内空气中以引起最大程度的视网膜新生血管 (NV)。在 P17 分离视网膜后，使用时间和浓度控制染色方法依次用加纳单叶凝集素 (GSL) IB4-594 和 GSL IB4-FITC 对视网膜全片进行染色。这种改进的方法仅使用两种染色介质，不需要其他阻断介质。通过荧光显微镜获取图像，并使用 Adob​​e Photoshop 合并。使用 Image-Pro Plus 测量视网膜新生血管面积和非灌注面积。

结果：用浓度为1:100的GSL IB4-594染色45分钟，几乎可以完全染色所有新生血管丛，这可以评估视网膜新生血管形成情况的可靠性和一致性。同时，用浓度为1:100的GSL IB4-FITC对OIR视网膜全组织进行染色过夜，再用GSL IB4-594染色，可以很容易地识别和量化OIR小鼠的视网膜无灌注区域、结构血管和新生血管丛。

结论：使用可重复和可量化的视网膜双染色法评估 OIR 模型中的 NV 和 NP 表明，采用合适的染色方法可以轻松计算 NV 和 NP 的比例非常重要。使用此方法获得的双特异性肽的抗血管生成功效评估等其他结果表明，使用视网膜双染色可以轻松识别 NV 和 NP 的比例具有更高的临床和科学研究价值。