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抽象的

大肠杆菌的表达和 SAK 融合的人干扰素 α 的纯化

拉吉·盖克瓦德

描述了一种改善大肠杆菌推断人干扰素 - α (rhIFN α2b) 从掺入体中作为葡萄球菌激酶 (SAK) 组合蛋白的重折叠和过滤的策略。这种组合蛋白不需要补充不常见的密码子来表达，并且被发现在 37oC 下保持稳定。重折叠的理想状态包括使用温和的变性操作符，而不需要其他专家来阻止聚合。SAKrhIFN α2b 组合蛋白利用两级净化进行有效过滤，并利用肠激酶将其分离成两块，具体为 SAK 和 IFN。这两种蛋白质都被视为有机动态的，表现为两个组合共犯的适当崩溃。分离的 IFN 在 RP-HPLC 上显示出与细菌测定的未标记过滤 IFN 相当的维持时间，正如在 Agilent 2100 生物分析仪上显示出相当的亚原子负载，显示肠激酶裂解后正确制备了 IFN。在比较探索性条件下，SAK-IFN 的表达水平比未标记的 IFN 高出两倍。干扰素 (IFN) 是大多数脊椎动物安全排列的细胞在困难情况下产生的特征性细胞标记蛋白，例如，感染、寄生虫和肿瘤细胞。由于靠近双链RNA（病毒污染的关键标志物），它们在由多种细胞传递的大量糖蛋白中占有一席之地。之后，人们认识到干扰素的临床能力，FDA 确认了这些药物，特别是 rhIFNα2a (Roferon An) 和 IFNα2b (Intron A) 用于治疗有害肿瘤和病毒性疾病。干扰素治疗（与化疗和放疗混合）用于治疗某些疾病，有助于治疗相关的卡波西肉瘤以及持续性乙型和丙型肝炎（Remington，1995）。