蛋白质组学与生物信息学杂志
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抽象的

非锚定多聚泛素链亲和力富集策略的广泛应用

Jo Strachan、Barry Shaw、Varun Gopala Krishna、Daniel Scott、Juan C del Pozo、Kristine Hill、Madhav Gautam、Dorota Skowyra、Andrew D. Jacobson、Chang-Wei Liu、Neil J Oldham 和 Rob Layfield

蛋白质泛素化是一种常见的翻译后修饰，其中选定的靶标被泛素蛋白共价修饰，通常以异肽连接的多聚泛素链的形式。最近，非锚定（即非底物连接）多聚泛素链也被描述并涉及一系列生物过程。串联重复泛素结合实体（TUBE）的开发，即与多聚泛素非共价相互作用的泛素结合结构域的工程重复，已经允许建立泛素修饰蛋白的亲和富集策略，在某些情况下具有连锁特异性。在这里，我们展示了游离泛素结合实体（FUBE）的实用性，基于对泛素游离 C 末端（人 USP5 的 Znf-UBP 结构域）具有高度特异性的泛素结合域。与不区分缀合或游离多聚泛素的 TUBE 相比，FUBE 专门识别非缀合形式的泛素，包括内源性非锚定多聚泛素链。使用 FUBE 进行的亲和富集表明，未锚定的多聚泛素链存在于不同的哺乳动物细胞系中，并在 26S 蛋白酶体受到药理学抑制时积累，并保留在蛋白酶体上。泛素序列的高度保守性使得 FUBE 也可用于从拟南芥和酿酒酵母等多种物种中纯化内源性非锚定多聚泛素链。