抗病毒与抗逆转录病毒杂志
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哺乳动物细胞系内全长和胞外结构域 EBOV 糖蛋白的重组形式的克隆、表达和纯化

Misaki Wayengera、Peace Babirye、Carol Musubika、Samuel Kirimunda、Moses L. Joloba

背景：全长埃博拉病毒糖蛋白（GP）散布在最外层脂膜上，形成刺突，介导病毒与宿主细胞的相互作用。所有 5 种已知埃博拉病毒也会产生分泌形式的 GP (sGP) 。这些属性使 GP 成为埃博拉病毒以及可能的泛丝状病毒靶向快速诊断测试 (RDT)、生物治疗和疫苗研发 (R 和 D) 的理想目标。重组扎伊尔埃博拉病毒（EBOV）GP的先前克隆主要使用昆虫（杆状病毒）表达系统。我们报告了重组 EBOV GP 在哺乳动物细胞系中的全长和胞外结构域 (ECD) 形式的克隆、表达和纯化。

方法和结果：将对应于 EBOV GP 全长和 ECD 形式的 669 和 643 个氨基酸 (aa) 残基的 2034 和 1956 个碱基对 (bp) 编码 DNA 序列亚克隆到 pTGE 质粒中。使用重组 pTGE 质粒转染在无血清 FreeStyleTM 293 表达培养基中生长的 293-6E HEK 哺乳动物细胞。使用细胞裂解物和/或培养上清液来获得纯化的蛋白质，然后进行 SDS-PAGE 和蛋白质印迹分析。纯化的全长 GP 在细胞裂解物中被检测为膜结合蛋白，Western blot 估计分子量约为 100 kDa (Cal.MW~71.67 kDa)；和 0.02 mg GP（浓度：0.2 mg/mL，纯度：~50%）。相反，在细胞培养液上清液中检测到 ECD GP，根据 SDS-PAGE 和 Western blot 估计分子量约为 116 kDa；和 1.6 毫克（浓度：

结论：在哺乳动物细胞内，重组全长 EBOV GP 主要以跨膜蛋白 (tGP) 的形式表达，而 ECD GP 则洗脱到培养基中。GP 的两种重组形式对于快速诊断测试 (RDT) 的研发至关重要。