病毒学与真菌学
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抽象的

共表达PRRSV GP5、M蛋白和shRNA的重组腺相关病毒的构建和检测

杨斌、席兰、邱艳

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）对养猪业构成严重威胁，在全球范围内造成了严重的经济损失。目前使用的灭活减毒病毒疫苗存在不安全、保护率低等缺点，迫切需要开发新的疫苗。为了探索和开发针对 PRRSV 的新型疫苗，构建了一种表达 ORF5 和 ORF6 蛋白以及针对 ORF7 的短干扰 RNA (shRNA) 的双功能重组腺相关病毒。针对ORF7的shRNA被插入到pAAV-U6-IRES-hrGFP的U6启动子前面的序列中，并且ORF5和ORF6被克隆到CMV启动子后面的序列中。用该载体与 pAAV-RC 和 pHelper 共转染的 293T 细胞产生了重组腺相关病毒。用该重组病毒转导的293T细胞表达GP5和M蛋白，用该重组病毒转导的Marc145细胞抑制PRRSV的复制。斑点印迹法检测重组病毒的感染滴度为1.9×1010 v.gmL，Western blot检测GP5和M蛋白。rAAV-shRNA-ORF5-6的成功构建为新型PRRSV双功能疫苗的开发铺平了道路。