临床与实验眼科学杂志
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小梁网细胞中可控的尿激酶基因表达

Mei Tsuda、Shiho Kaneko、Akira Ando、Tetsuya Nishimura、Emiko Okuda-Ashitaka、Seiji Ito、Makoto Taimoto、Miyo Matsumura 和 Kanji Takahashi

目的：青光眼是一种进行性视神经病变，最终导致与眼内压（IOP）升高相关的失明。小梁网（TM）和小管旁结缔组织中细胞外基质的积累，形成房水流出途径，可能是眼压升高的主要原因，因此纤溶系统可能与眼压的调节有关。我们研究了将可控尿激酶纤溶酶原激活剂 (uPA) 基因转移到 TM 细胞中的可能性。
方法：TM 细胞是从猪眼中新鲜分离的，而人 TM 细胞是在小梁切除术过程中获得的并进行培养。从人TM细胞中提取总RNA并反转录成cDNA。然后采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测uPA基因表达。将人uPA的cDNA亚克隆到表达载体（pEYFP-N1载体）和可控表达载体（TRE-Tight载体）中，然后将每个载体独立转染到培养的猪TM细胞中。将多西环素添加到培养基中以激活 pTet-ON 和 TRE-Tight 载体。最后，使用酶联免疫吸附测定（ELISA）检查uPA的表达。
结果：ELISA 结果显示，使用 pEYFP-N1 载体转染人 uPA 基因的猪 TM 细胞培养基中存在 uPA (3.5 ng/ml) 表达。多西环素在 pTet-On 和 TRE-Tight 载体中以剂量依赖性方式诱导人 uPA 与人 uPA 基因共转染 TM 细胞。
结论：使用 Tet-On 系统实现了 uPA 的可控基因转移到 TM 细胞中，uPA 可能降解近小管结缔组织中的细胞外基质。本方法可用作青光眼的新疗法。