病毒学与真菌学
开放获取

抽象的

用于诊断非洲猪瘟的抗原捕获酶联免疫吸附测定 (AC-ELISA) 的开发和评估

Afayoa M、Olaho-Mukani W、Okuni JB、Atuhaire DK、Ochwo S、Majid JK 和 Ojok L

非洲猪瘟（ASF）是一种猪的病毒性出血热，对非洲的生猪生产和家庭收入造成毁灭性影响。由于非洲猪瘟疫苗和治疗方法的缺乏，增加了对准确诊断的依赖，以此作为控制和可能根除该疾病的基础。因此，本研究的目的是开发和评估一种内部夹心酶联免疫吸附测定 (ELISA)，使用针对乌干达非洲猪瘟病毒 (ASFv) 分离株产生的抗体来诊断 ASF。ASFv 在猪肺泡巨噬细胞中生长，收获受感染的细胞，裂解并使用聚乙二醇 6000 沉淀病毒。在用含有 0.15M NaCl 的 50mM Tris-HCl PH 7.2 平衡的 Sepadex G-200 柱上纯化病毒，并分离病毒蛋白通过SDS-PAGE。目标蛋白（vp73），被定量并用于免疫兔子以产生针对它的多克隆抗体。纯化的免疫球蛋白 IgG（兔抗 ASF-vp73）用于夹心 ELISA 中的抗原捕获。使用八十八 (88) 份已知阳性和 176 份已知阴性猪血清样本来评估测定性能。ELISA 的诊断敏感性为 82.95%（95% CI，78-100%），诊断特异性为 96.59%（95% CI，90-100%）。阳性和阴性预测值分别为 92.4% 和 91%。不同运行中已知阳性样本的原始光密度值的样本间变异系数<10%（范围1.1-7.8），而运行之间样本内变异系数范围为0.6-5.5%。所开发的抗原捕获ELISA具有较高的诊断灵敏度和特异性，因此有利于检测活动性非洲猪瘟感染。然而，所开发的检测方法应使用不同实验室条件下更大的样本量和来自不同 ASF 流行国家的参考血清样本进行进一步验证。