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脂肪酶的热稳定性工程：蛋白质表面两种热稳定突变的累加效应研究

Rakesh K、Nisha C、Ranvir S、Pushpender KS、Jagdeep K*

在这项研究中，我们展示了两个单点突变 S311C (LipR2) 和 R214C (LipR3) 对蛋白质稳定性和生化特性整体变化的综合影响。我们发现这两个突变均位于表面附近，并分别增强了蛋白质的热稳定性（60°C 下，S311C 的 T1/2=4.5 小时，R214C=7 小时）。但是，它们的综合作用对热稳定性并没有叠加作用。双突变体 (LipR2 + LipR3) 的 T1/2 在 60°C 下为 4 小时。圆二色性 (CD) 和荧光研究也支持了我们的发现。同源建模研究表明，在双突变体 (LipR4) 中，Cys311 的侧链向本体溶剂突出，并且很容易被磺胺醇基团氧化。这可能是其热稳定性低于 LipR3 的原因。我们还观察到，Cys 214的侧链没有改变。此处，其中一个半胱氨酸 (Cys311) 的行为类似于亲水残基，而另一个半胱氨酸 (Cys 214) 的行为类似于疏水残基。

关键词：

脂肪酶；热稳定性；突变；酶；核苷酸序列

简介