临床毒理学杂志
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不同浓度5-氮杂胞苷实验诱导兔骨髓间充质干细胞生肌分化

费文勇、张耀、曹世超、刘明生、谭吉阳、王宣琪、谢斌、王景城

目的：探讨不同浓度5-氮杂胞苷（5-Aza）对兔骨髓间充质干细胞（BMSCS）的增殖和成肌分化能力的影响。

方法：对成年新西兰雄性大白兔的BMSCS进行体外扩增培养。0、5、10、20、40 μmol/L 5-Aza诱导细胞24 h，分别记为A、B、C、D、E组。A组为对照组， B、C、D、E组为实验组。使用MTT方法测量细胞在570 nm处的吸光度，该方法通常用于评估细胞活力。诱导后第1、3、5、7、9天，用倒置光学显微镜观察BMSCS的增殖和形态变化。培养第9天，我们消化并收集细胞并制备细胞玻片。通过免疫细胞化学评估肌动蛋白的表达，并通过荧光半定量分析确定肌动蛋白表达的百分比。采用定量RT-PCR检测肌钙蛋白和肌球蛋白mRNA的表达。

结果：流式细胞仪检测结果显示，表面标志物CD34、CD44和CD90的表达率分别为2.52%、94.6%和92.8%。3-(4, 5-二甲基-2-噻唑基)-2, 5-二苯基-2-四唑溴化物 (MTT) 测定显示 E 组细胞活力显着低于 A 组 (p <0.001)。第9天，C组细胞形态变化最明显。免疫组化检测A、B、C组肌动蛋白表达，半定量荧光显示C组BMSCS肌原分化程度显着高于A组（p=0.034）。诱导后第 9 天，C 组肌钙蛋白和肌球蛋白 mRNA 表达水平高于 A 组（分别为 p=0.04 和 p<0.001），如定量实时 PCR 所示。

结论：不同浓度的5-Aza对第五代骨髓间充质干细胞的增殖和成肌分化有不同的影响。此外，10 μmol/L 5-Aza 显着促进肌原性分化，而 40 μmol/L 5-Aza 对 BMSC 增殖有一定的毒性作用。