免疫组学研究
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功能性重组 MHC II 类分子和高通量肽结合测定

苏内·贾斯特森、米克尔·哈达尔、卡斯帕·兰伯特、丽丝·洛特·B·尼尔森

背景：II 类主要组织相容性复合体 (MHC-II) 分子特异性结合 CD4+ T 辅助细胞并将外源衍生肽表位呈递。MHC-II 的极端多态性阻碍了肽结合的完整分析。这也是产生 MHC-II 分子作为研究和操纵特定 T 辅助细胞反应的试剂的一个重大障碍。重组产生功能性 MHC-II 分子并测量它们与肽相互作用的方法将是非常需要的；然而，尚未出现共识方法。结果：我们生成了 α 和 β MHC-II 链构建体，其中跨膜区域被二聚化基序取代，并且 β 链的 C 末端与生物素化信号肽 (BSP) 融合，允许体内生物素化。这些链在大肠杆菌中作为包涵体单独产生，提取到尿素中，并使用常规柱色谱在变性和非还原条件下纯化。随后，用适当的肽将两条链稀释成折叠反应，从而有效形成肽-MHC-II 复合物。开发了几种不同形式的肽结合测定，包括均质、非放射性、高通量 (HTS) 结合测定。生成结合等温线，从而可以确定相互作用的亲和力。发现最好的粘合剂的亲和力在低纳摩尔范围内。成功开发了针对九种不同 MHC-II 分子的重组 MHC-II 分子和随附的 HTS 肽结合测定，包括 DPA1*0103/DPB1*0401 (DP401) 和 DQA1*0501/DQB1*0201，其中 α 链和 β 链都是多态性的，说明了分别生产两条链的优点。结论：我们已经成功开发了多功能 MHC-II 资源，这可能有助于生成 MHC II 类范围的试剂、数据和工具。