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238 kDa 大生物膜相关表面蛋白 (Bap) 在大肠杆菌中的异源表达和纯化

Sudhir K. Shukla 和 T. Subba Rao

生物膜相关蛋白 (Bap) 是一种大表面蛋白 (~238 kDa)，在葡萄球菌生物膜的形成中发挥着重要作用。金黄色葡萄球菌中的表面蛋白在功能上是冗余的，这意味着影响一种表面蛋白的无效突变体可能仅在所研究的功能中存在部分缺陷。因此，本研究的目的是在大肠杆菌中克隆、过表达和纯化完整的 Bap 蛋白，以便我们能够详细表征该蛋白，以供将来的实验使用。这项研究的挑战性部分是解决重组构建体的质粒不稳定问题，推测这是由于基因较大且存在 13 个直接串联重复序列，而传统的大肠杆菌在这种情况下。诸如 DH5-α 和 XL1-Blue 等大肠杆菌菌株被用作克隆宿主并优化基因过表达的参数。通过长程 Taq 聚合酶扩增完整的 bap 基因 (~6.8 kb)，并克隆到大肠杆菌 stbl2 和 BL21(DE3)-pLysS 中的表达载体 pET21b 中以进行过表达。克隆基因的 DNA 测序证实与 bap 基因原位 (S. aureus V329) 100% 同一性。通过 SDS-PAGE 和使用 Anti-His 标签抗体的蛋白质印迹证实了全长 Bap 蛋白在大肠杆菌 BL21(DE3)-pLysS 中的成功表达。据我们所知，这是在大肠杆菌中克隆和过表达全长 Bap 蛋白的首次尝试。重组 Bap 基因的使用将使我们能够研究和帮助其生物物理表征。(8 kb) 通过长程 Taq 聚合酶扩增并克隆到大肠杆菌 stbl2 和 BL21(DE3)-pLysS 中的表达载体 pET21b 中以进行过表达。克隆基因的 DNA 测序证实与 bap 基因原位 (S. aureus V329) 100% 同一性。通过 SDS-PAGE 和使用 Anti-His 标签抗体的蛋白质印迹证实了全长 Bap 蛋白在大肠杆菌 BL21(DE3)-pLysS 中的成功表达。据我们所知，这是在大肠杆菌中克隆和过表达全长 Bap 蛋白的首次尝试。重组 Bap 基因的使用将使我们能够研究和帮助其生物物理表征。(8 kb) 通过长程 Taq 聚合酶扩增并克隆到大肠杆菌 stbl2 和 BL21(DE3)-pLysS 中的表达载体 pET21b 中以进行过表达。克隆基因的 DNA 测序证实与 bap 基因原位 (S. aureus V329) 100% 同一性。通过 SDS-PAGE 和使用 Anti-His 标签抗体的蛋白质印迹证实了全长 Bap 蛋白在大肠杆菌 BL21(DE3)-pLysS 中的成功表达。据我们所知，这是在大肠杆菌中克隆和过表达全长 Bap 蛋白的首次尝试。重组 Bap 基因的使用将使我们能够研究和帮助其生物物理表征。通过 SDS-PAGE 和使用 Anti-His 标签抗体的蛋白质印迹证实了全长 Bap 蛋白在大肠杆菌 BL21(DE3)-pLysS 中的成功表达。据我们所知，这是在大肠杆菌中克隆和过表达全长 Bap 蛋白的首次尝试。重组 Bap 基因的使用将使我们能够研究和帮助其生物物理表征。通过 SDS-PAGE 和使用 Anti-His 标签抗体的蛋白质印迹证实了全长 Bap 蛋白在大肠杆菌 BL21(DE3)-pLysS 中的成功表达。据我们所知，这是在大肠杆菌中克隆和过表达全长 Bap 蛋白的首次尝试。重组 Bap 基因的使用将使我们能够研究和帮助其生物物理表征。