抗病毒与抗逆转录病毒杂志
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抽象的

Calibrachoa 斑驳病毒 (CbMV) 的传染性全长克隆

Anju Gulati-Sakhuja 和 Hsing-Yeh Liu

在 T7 RNA 启动子的控制下构建源自 Calibrachoa 斑驳病毒 (CbMV) 基因组 RNA (gRNA) 和亚基因组 RNA (sgRNA) 的全长 cDNA 克隆，并将其连接到质粒 pUC-18 中。由全长基因组 cDNA 克隆 ​​pUC-CbMV-FL 合成的带帽和不带帽的体外转录本在接种后 10 至 15 天内在机械接种的藜麦上产生褪绿局部损伤。从接种的有症状叶子中回收的子代病毒粒子具有与亲本病毒粒子相同的形态特性。在双抗体夹心酶联免疫吸附试验（DAS-ELISA）中，这些病毒粒子也与CbMV抗血清呈阳性反应，并通过Western blotting检测到病毒外壳蛋白。通过 Northern 印迹和体外翻译证实了 CbMV 基因组上存在 5 个开放阅读框 (ORF) 以及 gRNA 和 sgRNA 合成相应蛋白质。还确定了 CbMV 的三个 sgRNA 的转录起始位点。CbMV全长感染性cDNA克隆的成功构建使得开发可用于了解该病毒基因功能的分子工具成为可能。