蛋白质组学与生物信息学杂志
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抽象的

荧光标记的钙粘蛋白 G 蛋白偶联受体与苏云金芽孢杆菌Cry1Ab 毒素的相互作用

刘莉、Stefanie Boyd、Mehraban Kavoussi、Lee A Bulla Jr. 和 Duane D Winkler

苏云金芽孢杆菌产生的 Cry1Ab 毒素与BT-R1 第 12 胞外域模块 (EC12) 中的保守结构基序结合，BT-R1 是烟草天蛾Manduca sexta中肠上皮细胞膜中含有的钙粘蛋白 G 蛋白偶联受体 (GPCR)。毒素结合将信号传递到细胞中并开启多步信号转导途径，最终导致细胞死亡。使用色谱纯化的 Cry1Ab 和 EC12 蛋白，我们证明了这两种蛋白在溶液中直接形成稳定的复合物，并在天然聚丙烯酰胺凝胶上将其可视化。此外，我们通过将第 36 个残基转化为半胱氨酸来生成荧光 EC12 探针，从而通过定点诱变实现马来酰亚胺介导的 Alexa-488 荧光染料与 EC12 的缀合。此外，我们将EC12的第44位残基改为色氨酸，大大提高了蛋白质定量和溯源的准确性。使用荧光标记的 EC12 探针进行直接和竞争性结合测定，我们能够确定溶液中的结合特异性。