克隆与转基因
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抽象的

与转染 GBM 细胞中转录因子 NFkB 识别序列的低甲基化相比，CMV 启动子的大肠杆菌dcm甲基化得以维持

Dock H、Sjögren HO、Salford LG、Widegren B 和薛 ZT

人类巨细胞病毒（CMV）立即早期启动子已被广泛用于驱动转基因哺乳动物细胞中的靶基因表达。CMV 启动子的 DNA 甲基化已被证明是启动子活性降低和靶基因沉默的原因。我们建立了一个体外模型系统，其中用从 dcm 阳性 (dcm+) 大肠杆菌菌株分离的 pAdTrack-CMV-GFP 质粒转染人脑癌细胞（多形性胶质母细胞瘤，GBM）。我们发现，位于CMV启动子区-304至-300 nt和-497至-493 nt位置的两个CCTGG序列中，所有分析的克隆中内部C均被甲基化，即大肠杆菌dcm甲基化模式在整合到人类基因组后，其保留在 CMV 启动子区域。相比之下，我们发现CMV启动子增强子区域（从-107到-270 nt）的转录因子NFkB和某些其他转录因子的识别位点被低甲基化。这可能解释了为什么 CMV 启动子保持活跃模式，驱动 GFP 表达，尽管 CMV 启动子已被证明甲基化。我们注意到CCTGG序列也包含在转录因子NFkB的结合序列基序中。因此，我们通过数据库检索全面研究了转录因子，以及包含dcm甲基化序列CCW(A/T)GG的响应元件。列出了转录因子和相应的调控基因。