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使用共轭磁性纳米颗粒进行微装置免疫分析，用于快速检测抗环瓜氨酸肽（抗 CCP）

肯尼娅·查韦斯·拉莫斯、玛丽亚·德尔·皮拉尔·卡尼萨雷斯·马西亚斯

抗环瓜氨酸肽 IgG 免疫毒素（抗 CCP）是在称为环瓜氨酸肽 (CCP) 的翻译后修饰肽存在时作为免疫反应产生的。抗CCP被认为是分析类风湿性关节炎（RA）的特异性生物标志物，并且由于其高度特异性，可以对其他风湿性疾病进行鉴别诊断。这些免疫毒素可以在 RA 的早期阶段被检测到，甚至在出现该疾病的第一个症状之前长达 10 年，为及时治疗打开了机会之窗。最广泛使用的抗 CCP 检测方法是酶联免疫吸附测定 (ELISA)。尽管 ELISA 具有极高的灵敏度，但仍被认为是一种耗时的检测方法。在这项工作中，开发了一种简单的直通道微器件和 CCP 共轭磁性纳米颗粒 (MNP-CCP) 作为定量抗 CCP 的固体支持物，并对其进行了血浆探测。对于分光光度分析，使用了具有光流 Z 池设计和光纤的微型装置。微装置免疫测定仅使用 6 µL 样品和试剂，几乎比商业抗 CCP ELISA 试剂盒快九倍，但获得了相同的结果。识别范围为 0.70-2000 U mL-1，发现限制为 0.70 U mL-1（比 ELISA 包的设想精细 16 倍）。具有形成的 MNP-CCP 的微装置免疫测定是一种用于对抗 CCP 评估的简单技术，比 ELISA 包更便宜、更快速且更灵敏。逐步，RA 测定中采用了对瓜氨酸肽免疫毒素 (ACPA) 具有敌意的位置的测量方法。本次审核总结了 ACPA 检查的生物学前提和改进、可获取的 ACPA 测量及其呈现属性，以及单独 ACPA 的分析特性以及与早期 RA 中类风湿因子 (RF) 的对比。我们还调查了可用测试的关系、准确性、费用和成本可行性、可访问性、健全性和可重复性。综合来看，资料表明ACPA对于早期RA具有比RF更高的特殊性、合理性强、影响力强、成本充足性明确、强度大、可重复性强等特点。鉴于 ACPA 的老板执行质量和不断扩大的可及性，ACPA 正在成为 RA 分析中最有价值的单一测试。早期类风湿性关节炎症 (RA) 的确定取决于临床测量，包括病史和实际测试发现、研究设施和放射学结果。在 RA 中，不可逆转的伤害常常立即发生。随着越来越多的证据支持早期分析和强有力的治疗以预防伤害和无力，必须改进早期 RA 的识别和发现。不久前，区分类风湿因子 (RF)（针对免疫球蛋白 G (IgG) 原子 Fc 部分的免疫毒素）的措施已成为发现 RA 的重要血清学检测。抗瓜氨酸肽反作用剂（ACPA）测试是在过去十年中创建和普及的，目前正在临床上使用。由于 ACPA 在 RA 症状出现之前就存在，并且可以预测 RA 的发展，因此它们是疾病早期有价值的诊断测试。本综述综合了当前可用的有关 RF 和 ACPA 诊断早期 RA 的诊断特性的数据。鉴于 ACPA 的最新发展及其在改进早期未分化 RA 识别方面的潜在作用，我们重点关注 ACPA。本综述中包含的数据来自医学文献搜索、网站和与营销检测方法的公司的联系，以及从该领域专家获得的信息和意见。我们提供了有关 ACPA 检测的生物学基础和开发、可用检测以及有关检测性能特征的数据的信息，特别是在同行评审期刊上发表的数据，也包括制造商公布的那些。审查这些测试的诊断特性，包括但不限于敏感性、特异性、阳性和阴性预测值。1940年，Waaler观察到，将RA患者的血清与IgG致敏的绵羊红细胞混合可以抑制溶血，但会引起细胞凝集。Rose及其同事后来报告说，RA血清比健康个体的血清更能凝集涂有兔抗羊红细胞抗体的羊红细胞。这些发现构成了最早的 RA 检测（Waaler-Rose 检测）的基础。RF 检测最常检测针对 IgG 分子 Fc 部分的 IgM 抗体。凝集试验仅测量 RF IgM，并且仍然是使用最广泛的检测方法。凝集测定以效价或单位报告。阳性的临界值由制造商根据 RA 患者与健康对照的结果确定。凝集测定对 RA r 的敏感性为 70-85%，特异性为 40-90%，因为在没有 RA 的个体中可能会发生凝集。其他 RF 测定方法也已开发出来，包括酶联免疫吸附测定 (ELISA)、放射免疫测定 (RIA) 以及激光或速率浊度测定技术。还提供 IgA 和 IgG RF 检测分析。通过这些技术进行 RF 诊断 RA 的敏感性为 50-90%，特异性为 50-95%。这些广泛的范围反映了测试人群的差异。研究直接比较了已确诊的 RA 患者、健康对照者和非炎症性关节病患者的 RF 检测技术，据报道，乳胶凝集试验的性能与比浊法和放射免疫测定的性能相似。在对 1998-2005 年 50 项 RF 检测研究进行的荟萃分析中，IgM、IgA 和 IgG RF 检测的合并似然比（取决于灵敏度和特异性）在数量上相似，并且使用较高与较低 RF 滴度进行检测的结果相似。积极性。假阳性 RF 结果通常发生在慢性感染、恶性肿瘤和其他风湿性疾病的情况下。在 1-4% 的健康年轻人的血清中检测到 RF，在没有 RA 的老年人中检测到的比例更高。然而，射频测定广泛可用，相对便宜，并且被初级保健医生和关节炎专家所理解。在对 1998-2005 年 50 项 RF 检测研究进行的荟萃分析中，IgM、IgA 和 IgG RF 检测的合并似然比（取决于灵敏度和特异性）在数量上相似，并且使用较高与较低 RF 滴度进行检测的结果相似。积极性。假阳性 RF 结果通常发生在慢性感染、恶性肿瘤和其他风湿性疾病的情况下。在 1-4% 的健康年轻人的血清中检测到 RF，在没有 RA 的老年人中检测到的比例更高。然而，射频测定广泛可用，相对便宜，并且被初级保健医生和关节炎专家所理解。在对 1998-2005 年 50 项 RF 检测研究进行的荟萃分析中，IgM、IgA 和 IgG RF 检测的合并似然比（取决于灵敏度和特异性）在数量上相似，并且使用较高与较低 RF 滴度进行检测的结果相似。积极性。假阳性 RF 结果通常发生在慢性感染、恶性肿瘤和其他风湿性疾病的情况下。在 1-4% 的健康年轻人的血清中检测到 RF，在没有 RA 的老年人中检测到的比例更高。然而，射频测定广泛可用，相对便宜，并且被初级保健医生和关节炎专家所理解。以及使用较高与较低 RF 滴度来检测阳性的情况。假阳性 RF 结果通常发生在慢性感染、恶性肿瘤和其他风湿性疾病的情况下。在 1-4% 的健康年轻人的血清中检测到 RF，在没有 RA 的老年人中检测到的比例更高。然而，射频测定广泛可用，相对便宜，并且被初级保健医生和关节炎专家所理解。以及使用较高与较低 RF 滴度来检测阳性的情况。假阳性 RF 结果通常发生在慢性感染、恶性肿瘤和其他风湿性疾病的情况下。在 1-4% 的健康年轻人的血清中检测到 RF，在没有 RA 的老年人中检测到的比例更高。然而，射频测定广泛可用，相对便宜，并且被初级保健医生和关节炎专家所理解。1964 年，Nienhuis 及其同事描述了一种自身抗体，他们称之为抗核周因子。通过对人颊粘膜细胞的间接免疫荧光试验检测到，抗核周因子识别抗原存在于细胞核周围的透明角质颗粒中。高达 90% 的确诊 RA 患者中存在抗核周因子，特异性为 73-99%。Young和他的同事后来利用间接免疫荧光法在大鼠食管的哭泣切片上检测到了抗角蛋白抗体。