糖类组学与脂质组学杂志
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不同生产载体表达的鸡免疫球蛋白 Y 糖蛋白的 N-糖基化谱

近藤幸子、八木博和、神谷由纪子、伊藤明彦、久原元树、九藤绫子、高桥法子和加藤浩一

蛋黄中含量丰富的免疫球蛋白 Y (IgY) 被广泛用作免疫化学试剂，最近被认为是一种潜在的治疗工具。IgY 的 Fc 部分在 Asn407 处保留了一个 N-糖基化位点，该位点在结构上与哺乳动物中其他 Ig 类别的保守糖基化位点相同。尽管存在这些相似之处，但鸡血清和蛋黄中的 IgY 已被证明是不同的糖型，最好的例子是单葡萄糖基化高甘露糖型寡糖的高发生率，而这种寡糖在哺乳动物糖蛋白中很少发现。为了进一步了解 IgY 的糖基化特性，我们报告了重组鸡 IgY 的 N-糖基化比较分析，这些重组鸡 IgY 的可变区具有相同的氨基酸序列，但由不同的生产载体表达。从这些 IgY 上切割下来的 N-连接寡糖经过多维 HPLC 作图并结合质谱分析。IgY 的 N-糖基化谱显示出明显不同的模式，具体取决于生产载体。鸡杂交瘤细胞表达的 IgY 保留了成熟的高甘露糖型寡糖，而 CHO 细胞表达的 IgY 经历了广泛的 N-聚糖加工并表现出高天线寡糖。不同载体表达的 IgY 之间的核心岩藻糖基化和二等分 N-乙酰氨基葡萄糖化水平以及唾液酸连接类型也观察到显着差异。尽管存在这些差异，重组 IgY 抗体通常表达相当多的单糖基化糖型，表明这种糖基化特征是，在某种程度上，这与 IgY-Fc 独特的四级结构有关，该结构至少部分地掩盖了 Asn407 N-聚糖并将其与内质网中的伴侣机制隔离。我们认为 N-聚糖加工和 IgY 四级结构形成的时间和效率与 IgE 有很大不同，并且取决于用于重组 IgY 生产的载体，导致单葡萄糖基化物种的发生率不同。