遗传综合征与基因治疗杂志
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B 型血友病基因治疗后人因子 IX 和浸润 T 细胞的最佳免疫荧光染色

杰弗里·L·罗杰斯和布拉德·E·霍夫曼

免疫荧光成像是研究转导组织内基因治疗结果的重要工具。利用多重标记技术，可以表征转基因的局部表达，并通过细胞毒性 T 细胞浸润来评估适应性免疫反应的严重程度。为了防止对重要病理事件的误解，实验参数必须是最佳的，这一点至关重要。为了优化该染色方案，使用编码人因子 IX 的重组腺相关病毒转导小鼠肝脏和骨骼肌。在测试了几种常见的冷冻保存和固定技术后，我们发现，通过在液氮冷却的异戊烷（也称为甲基丁烷或 2-甲基丁烷）上冷冻肌肉组织，然后在室温下用丙酮固定，可以实现最佳的组织完整性和抗原（因子 IX 和 CD8）检测。本文描述的染色方案仅需要大约两个小时，但即使在共焦显微镜下高放大倍数下也能保持精致的特异性。