蛋白质组学与生物信息学杂志
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P68/ Ddx5 RNA 解旋酶在体内与DNA 甲基转移酶 Dnmt3a1 和 Dnmt3a2相互作用并共定位

Anastasia Mpakali、Andriana G. Kotini、Magda Spella、Marina Kouyialis、Angelliki Tserga、Leonidas Fragkos-Livanios、Martina Samiotaki 和 Theodora Agalioti

5-甲基胞嘧啶 (5meC) 基因组甲基化模式在哺乳动物发育中发挥着至关重要的作用，并在癌症中发生改变。创建、维持和修改 DNA 甲基化模式的酶是 DNA 甲基转移酶 (Dnmts)，它们均由必需基因编码。de novo Dnmts -Dnmt3a 和 Dnmt3b - 通过在先前不存在甲基化的地方引入 DNA 甲基化标记，在哺乳动物发育早期建立 DNA 甲基化模式。这些酶对特定 DNA 序列不表现出亲和力，因此它们对特定 DNA 位点的募集及其活性必须受到严格调控。特别是，Dnmt3a2（Dnmt3a 基因座产生的两种蛋白质亚型之一）是小鼠胚胎干细胞中最丰富的 DNA 甲基转移酶。为了识别 Dnmt3a（和 DNA 甲基化）调节因子，我们通过 Pull Down 和质谱法在 mESC 中寻找 Dnmt3a2 相互作用蛋白。DEAD box p68/Ddx5 RNA 解旋酶在体外经鉴定可直接与 Dnmt3a1 和 Dnmt3a2 相互作用体内。我们创建了一种突变型 Ddx5 (Ddx5 MUT ) 蛋白，与 wt 蛋白相比，其核定位模式发生了改变。野生型和突变型 Ddx5 均在体外直接相互作用，并在体内与 Dnmt3a 蛋白共定位。我们的数据表明 Dnmt3a/Ddx5 相互作用可能对于调节体内DNA 甲基化/去甲基化动力学具有重要意义。