蛋白质组学与生物信息学杂志
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基于磷酸标签的微阵列技术推进磷酸化蛋白质组学

木下英二、木下菊田惠美子和小池彻

蛋白质的可逆磷酸化是一种主要的翻译后修饰，调节许多重要的细胞过程，包括信号转导、基因表达和细胞周期进程。某些蛋白质磷酸化状态的变化与多种人类疾病有关。因此，定量测定蛋白质磷酸化水平的有效分析技术是蛋白质组研究的重要工具，特别是在疾病诊断和药物发现方面。由于基于质谱的鸟枪蛋白质组学方法的巨大进步，现在可以大规模鉴定磷蛋白。然而，这些技术需要昂贵的仪器，并且涉及通过酶消化富集磷酸肽来进行样品制备的复杂程序。关于磷酸化蛋白质组的分析，涉及肽或蛋白质阵列的微阵列技术已显示出作为具有成本效益、高通量和方便的方法的巨大潜力，用于通过磷酸化反应来定义与信号转导相关的活性。我们最近开发了一种磷酸盐亲和探针，适用于监测蛋白质磷酸化水平的变化。这种亲和探针被称为生物素悬垂的 Phos-tag {Phos-tag Biotin; Phos-tag=1,3-双[双(吡啶-2-基甲基)氨基]丙-2-醇二锌(II)络合物}。我们已经证明了 Phos-tag 生物素作为一种新型磷酸盐亲和探针在一系列技术中的实用性，包括基于微阵列的方法，用于确定大量肽和蛋白质的磷酸化状态。在这里，我们回顾一下磷酸标签生物素的一些更先进的应用。我们讨论了基于 Phos 标签的微阵列技术对蛋白质磷酸化多重检测的影响，并将这些技术与微阵列上的传统探测程序进行比较。