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抽象的

细胞色素P450-2D6的重组表达及其在他莫昔芬代谢中的应用

VE Munyai、T Mulaudzi-Masuku 和 E Iwuoha

抽象的

简介：乳腺癌是全世界女性死亡人数最多的主要原因。它主要是由雌激素诱导的，雌激素刺激DNA使细胞增殖成癌细胞。他莫昔芬作为前药，用于治疗和预防雌激素阳性的女性和男性的乳腺癌。他莫昔芬代谢物通过与雌激素结合并竞争与雌激素受体的结合来发挥作用，从而阻止癌细胞的发展。细胞色素 p450-2D6 (CYP2D6) 是他莫昔芬代谢中的主要酶之一。由于这种酶的多态性，对他莫昔芬治疗的反应存在个体间差异。因此，需要诊断服用他莫昔芬的患者是否能够代谢该药物。

目的：本研究旨在开发一种基于 CYP2D6 的电化学生物传感器，用于测试乳腺癌患者中他莫昔芬的代谢。

方法：测定CYP2D6的理化参数，为CYP2D6基因扩增、克隆至pTrcHis TOPO载体、在大肠杆菌中过表达并纯化，以获得有活性的重组CYP2D6。使用紫外可见光谱和发射光谱对 CYP2D6 的他莫昔芬代谢进行测定，并使用基于 CYP2D6 的生物传感器通过电化学技术进行验证。

结果与讨论：CYP2D6 是一种 50.05397 kDa 的不溶性跨膜蛋白，本质上呈弱酸性 (pI = 6.21)。CYP2D6 基因是成功扩增，具有 1.375bp 条带，随后克隆到 pTrcHis TOPO 载体中。该蛋白在TOP10大肠杆菌细胞中过表达，由于其在包涵体中表达，因此在变性条件下提取和纯化。P450 GLO CYP2D6 测定确定该蛋白质已成功重折叠为其活性形式。CYP2D6 的特征在于 215 nm（紫外-可见）和 425 nm（发射光谱）处的 Soret 谱带。电化学测定表明，该酶具有活性，并且能够在 0.6 V 电位下将他莫昔芬代谢成活性形式。因此，这些结果足以应用于开发基于 CYP2D6 的乳腺癌治疗期间他莫昔芬代谢传感器。