临床与实验眼科学杂志
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抽象的

寻找视网膜中的新基因磷脂酶结构域 2 (Pnpla2) 的选择性剪接变体

杰奎琳·塔莉亚·德斯贾丁、S 帕特里夏·贝塞拉和普雷蒂·萨勃拉曼尼安

目的： Ensembl 和其他表达序列标签 (EST) 数据库揭示了小鼠和大鼠中Pnpla2（编码色素上皮衍生因子受体 (PEDF-R) 的基因）推定的选择性剪接变体。本研究的目的是获得小鼠Pnpla2剪接变异的实验证据。

材料和方法：使用源自光感受器（661W 细胞）和小鼠眼、心脏、脂肪、肾和肝组织的小鼠细胞系培养物。从细胞和组织中分离信使RNA (mRNA)，并合成互补DNA (cDNA)。聚合酶链式反应 (PCR) 引物对被设计为位于推定剪接位点的侧翼。外显子排除实时 PCR 用于减少全长Pnpla2转录物的扩增并增强低丰度剪接变体的扩增。PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳解析并用UV透照仪检测。含有人全长PNPLA2 cDNA 或PNPLA2 的重组质粒缺少外显子 5b (E5b) 的 cDNA 是验证该技术的对照。制备 661W 细胞的总细胞裂解物。使用蛋白质印迹法进行PEDF-R蛋白检测。

结果：从 661W 细胞或各种小鼠组织获得的Pnpla2转录物的 PCR 产物在用多个引物对扩增后分解为单个条带。以不同摩尔比同时扩增两个 PNPLA2 cDNA 会阻止检测到较低丰度的转录物。然而，即使使用外显子排除方法显着排除全长Pnpla2转录物的 cDNA ，也没有检测到与Pnpla2剪接变体相对应的条带。尽管如此，使用两种不同抗体对总 661W 细胞裂解物进行的蛋白质印迹揭示了 PEDF-R 蛋白的亚型。

结论：这些数据提供了存在单一全长Pnpla2转录本的证据，该转录本可以产生经过翻译后加工的单一蛋白质产物。