临床和细胞免疫学杂志
开放获取

抽象的

优化甘露糖受体的稳定表达和表征

大卫·J·维格鲁斯特、谢雷尔·维克和弗吉尼亚·L·谢泼德

甘露糖受体 (MR) 是一种巨噬细胞表面受体，可识别多种细菌、真菌和病毒病原体的病原体相关分子模式 (PAMP)。MR 的功能研究因表达受体的人类细胞系的稀缺而受到阻碍。目前可用于 MR 生物学研究的模型系统通常表现出低水平的表达，并且不保留许多经典的 MR 特性。尽管一些实验室已经报告了质粒中 MR 的瞬时和稳定表达，但我们实验室的初步数据表明，这些质粒产生的蛋白质缺乏关键结构域，并且通常随着时间的推移不稳定。在本报告中，我们描述了用于瞬时和稳定 MR 表达的新型人类密码子优化系统的生成和表征。对导致 mRNA 不稳定的稀有密码子和序列进行修饰，以产生质量和数量均得到改善的 mRNA。瞬时且稳定表达的优化受体的共焦成像显示其分布与之前的报告一致。为了证明优化受体的功能特征，我们进一步证明密码子优化的 MR 质粒的引入可以赋予 MR 相关的吞噬作用金黄色葡萄球菌对非吞噬性 HeLa 细胞的影响。我们发现三个分子参与金黄色葡萄球菌的参与和内化。在暴露于 pHrodo 染色的金黄色葡萄球菌后，发现 MR 与 Toll 样受体 2 (TLR2) 和 Rab5 共定位，表明这三个分子之间的合作以接合和内化细菌颗粒。这项研究描述了一种具有转染能力、优化的 MR 受体，其功能特征与野生型受体相似，并进一步证明了用于继续研究 MR 生物学和功能的新系统