临床与实验眼科学杂志
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人角膜内皮细胞分离的标准化以及使用裸露的人羊膜作为人角膜内皮细胞的支架

卡尔帕纳·苏雷什、艾伦·马修·庞努斯、莎拉·库鲁维拉和坦维·卡纳

目的：标准化人角膜内皮细胞 (HCEC) 的分离，并使用裸露的人羊膜 (HAM) 作为分离 HCEC 的支架。
方法：使用 1.2 单位/ml 的 Dispase II 在 37°C 下剥离人羊膜 60 分钟，然后进行机械刮擦。从不适合手术使用的人类供体尸体眼中剥离角膜内皮和后弹力层膜片，并在 37°C 和 5% CO2 下用 2 mg/ml 胶原酶 II 溶液酶消化 2 小时。将分离的细胞重悬于含有补充物的培养基中，并铺板到未包被的培养皿上四小时，以消除比内皮细胞粘附更快的成纤维细胞。预铺板后，将非贴壁细胞接种到明胶包被的培养皿上或接种到补充有生长因子的 OptiMEM 培养基中的裸露羊膜上。通过显微镜分析细胞的粘附性和多边形形态。
结果：裸露羊膜的显微镜检查显示没有上皮细胞残留。角膜的酶消化留下无细胞后弹力层，内皮细胞单独或成簇漂浮，预铺板有助于更多无成纤维细胞的内皮细胞分离。很少有分离的细胞能够在羊膜上搭建支架，并在随后的培养基更换过程中保留这种粘附力。
结论：使用温和酶 Dispase-II 对 HAM 进行长期处理会导致膜剥脱，而膜可作为收获角膜内皮细胞的成功支架。这种方法可以作为内皮细胞增殖的成本有效的替代方案和作为角膜组织工程研究的体外模型进行进一步探索。