糖类组学与脂质组学杂志
开放获取

抽象的

猪肾 Na + /K + -ATP 酶附着的N -聚糖的结构分析

神奈川真由美、松本佳奈、岩崎典之、林裕太郎、山口芳树

Na+/K+-ATP 酶是一种由 α、β 和 γ 亚基组成的膜糖蛋白，可在质膜上产生离子梯度。离子泵主要由α亚基完成，而糖基化的β亚基与α亚基紧密结合以组装泵，在Na+/K+-ATP酶的稳定和成熟中发挥重要作用。越来越多的证据表明，β 亚基的 N-聚糖有助于细胞与细胞之间的相互作用，并且细胞接触的紧密程度受 N-聚糖分支的调节。然而，由于缺乏寡糖结构的详细信息，N-聚糖的功能尚未完全了解。我们在这里对猪肾 Na+/K+-ATPase 上附着的 N-聚糖进行糖基化分析，以便更好地了解 Na+/K+-ATPase 介导的细胞粘附机制。

我们将猪肾外髓质中的Na+/K+-ATP酶纯化至均质，并用去污剂C12E8将其溶解。通过胰蛋白酶消化物的 LC-MS/MS 分析，将由此获得的酶鉴定为 α1β1 亚型。在MS分析过程中，我们发现α亚基的Lys456被4-羟基壬烯醛（一种醛类脂质过氧化产物）部分修饰。通过 SDS-PAGE 监测的酶促去糖基化的时间进程分析，证实 β1 亚基上的三个 N-糖基化位点被完全占据。对 Na+/K+-ATP 酶衍生的吡啶胺化寡糖的 HPLC 分析表明，高甘露糖型寡糖占主导地位，而大多数含量较低的复合型寡糖则被半乳糖残基封端。在 α1 亚基的四个共有 N-糖基化位点上未检测到聚糖。我们简要讨论了 Na+/K+- ATP 酶通过 β-β 相互作用寡聚化组装 N-聚糖并促进细胞与细胞粘附的可能性。