临床与实验眼科学杂志
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二维微分凝胶内电泳 (2D-DIGE) 揭示了与人小梁网细胞中交联肌动蛋白网络相关的蛋白质

Jaclyn Y Bermudez、Hannah C Webber、Gaurang C Patel、Liang-Jun Yan、Abbot F Clark 和 Weiming Mao

背景：原发性开角型青光眼（POAG）的主要危险因素是眼内压（IOP）升高。在 POAG 患者中，通过小梁网 (TM) 的流出阻力异常升高。青光眼相关的 TM重要病理变化之一是过度交联肌动蛋白网络 (CLAN) 的形成。CLAN 是在汇合的青光眼 TM 细胞和组织中发现的网状多边形结构。青光眼相关因子转化生长因子β2 (TGFβ2) 和糖皮质激素诱导非青光眼TM 细胞(NTM) 中CLAN 的形成。CLAN 可能会增加细胞硬度并改变体内平衡，从而导致眼压升高。

方法：我们使用蛋白质组学方法来鉴定 CLAN 相关蛋白。我们用 0.1% 乙醇（EtOH；媒介物）、100 nM 地塞米松 (DEX) 或 5 ng/ml TGFβ2 加 0.1% EtOH 处理汇合的原代 NTM 细胞 7 天以诱导 CLAN。提取含有细胞骨架的 Triton 不溶级分用于二维微分凝胶内电泳 (2D-DIGE)。使用质谱 (MS) 来鉴定2D 凝胶中的差异表达蛋白。使用免疫细胞荧光 (ICF) 显微镜证实了已识别蛋白质与 CLAN 的共定位。

结果： 2D-DIGE 显示两个治疗组中有 103 个差异表达的蛋白质。MS 鉴定出了 23 种最富集的蛋白质。ICF 显示钙结合蛋白、钙调蛋白、肌球蛋白轻链和原肌球蛋白与 CLAN 共定位。

结论：我们鉴定了在 DEX 或 TGFβ2 诱导的 CLAN 形成的 NTM 细胞中差异表达的蛋白质子集。这些蛋白质在 CLAN 形成和/或维持中的潜在参与需要进一步研究。这些蛋白质可能为青光眼的发病机制提供新的见解。