白血病杂志
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利用下一代深度测序分析越南伊马替尼耐药慢性粒细胞白血病患者的 BCR-ABL1 激酶结构域突变

Duong CQ、Nguyen C、Nguyen TT、Nguyen LV、Pham HQ、Trinh HTT、Tran HC、Le TQ、Pham HT、Hong TH、Nguyen TH、Truong HN、Bach KQ 和 Nguyen TA

背景：慢性粒细胞白血病是一种克隆性骨髓增生性肿瘤，其特征是存在染色体易位t(9; 22)(q34; q11)。在超过 95% 的病例中发现了这种情况，并导致 BCR-ABL1 融合蛋白具有高酪氨酸激酶活性。在过去的几十年中，伊马替尼和其他几代酪氨酸激酶抑制剂已被有效地用于该疾病的靶向治疗。然而，由于BCR-ABL1融合基因激酶结构域内的突变，最近报道了许多耐药病例。为了提供有关该发病率的更多信息，我们对 141 名伊马替尼耐药的慢性粒细胞白血病患者进行了回顾性研究，通过深度测序分析激酶结构域突变。另一组 20 名未经治疗的患者被添加为对照组。方法：从骨髓细胞中提取RNA，然后合成cDNA。进行巢式聚合酶链反应以扩增 BCR-ABL1 融合基因的激酶结构域。监测扩增产物的大小、浓度并制备DNA测序文库。使用 Illumina MiSeq 测序仪和 Sequence Pilot 软件进行序列分析。随机选择测序结果进行桑格测序。结果：对照组均未出现激酶结构域突变阳性。141 名患者中有 47 名 (33%) 检测出至少一种核苷酸取代。测序结果也得到桑格测序的证实。在这 47 个样本中，鉴定出了 28 种类型的 72 个核苷酸取代，以及 24 个密码子的改变。其中，Y253F/H、M351T、G250E、F359V/I 和 M244V 是最常见的突变，而T315I仅占4.1%。还有许多样本包含多种替换和新变体。结论：新一代深度测序是检测激酶结构域突变的一种敏感且有效的方法，我们的结果可以为慢性粒细胞白血病耐药突变提供进一步的信息。