细胞科学与治疗杂志
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非清髓性骨髓干细胞移植治疗 mdx 小鼠肌营养不良

VM Mikhailov、AV Sokolova、VV Kravtsova、VV Zenin、EV Kaminskaya、NA Timonina 和 II Krivoi

背景：Mdx 小鼠是无法治愈的人类单基因疾病杜氏肌营养不良症 (DMD) 的实验模型。治愈的希望与干细胞疗法的使用有关，但并非完全如此。多项实验结果分析表明，肌内移植不同来源、不同类型、具有干细胞特性的细胞，并不能将突变型横纹肌纤维（SMF）转化为野生型SMF。结论是只有用野生型BM细胞替代突变型骨髓(BM)才能将突变型SMF转化为野生型SMF。不幸的是，以 11、7 或 5 Gy 的致死剂量对 mdx 小鼠进行 X 射线照射，然后移植野生 C57BL/6 小鼠 BM 细胞，并没有增加 SMF 抗肌营养不良蛋白的合成。本研究的目的是分析 mdx 小鼠横纹肌在 3 Gy 剂量的 X 射线照射后进行 C57BL/6 骨髓细胞移植后肌营养不良蛋白的合成。我们还研究了膈肌纤维 NMJ 结构的修复。为了确认观察到的 NMJ 结构变化的功能意义，还对膈肌纤维 NMJ 的静息膜电位进行了研究。方法：对1～1.5月龄mdx小鼠进行X射线照射，剂量为3 Gy。第二天，以每只小鼠(15-20)×106个细胞的量静脉内注射新鲜制备的BM细胞。对移植后 2、4 和 6 个月的动物进行研究。每个实验组的小鼠包括3-8只动物。穆斯。股四头肌和膈肌纤维及其神经肌肉接头（NMJ）正在接受研究。为了进行嵌合登记，进行了一项特殊研究，在 3 Gy 照射后将 GFP 阳性 C57BL/6 BM 细胞移植到 mdx 小鼠中。6 个月后，从长骨中分离出 BM 细胞并制备涂片。甲醇固定后，涂片用碘化丙啶染色，并在共聚焦显微镜 LSM 5 Pascal（Carl Zeiss，德国）上进行研究，以计算与核细胞总量相关的 GFP 阳性细胞部分。结果：我们观察到，在 3 Gy 剂量的非致死性 X 射线照射后，肌营养不良蛋白合成稳定增长。移植后股四头肌肌营养不良蛋白阳性SMF部分由1%上升至4%（2个月）、12%（4个月）和27%（6个月）。抗肌营养不良蛋白合成的增长伴随着SMF死亡水平的降低、无中央核的部分SMF增加至22%、MNJ分支的积累和静息膜电位的修复。移植后6个月时，嵌合GFP移植mdx小鼠的BM涂片上所有有核细胞之间的GFP阳性细胞比例为3.3±0.8%，这表明小鼠的嵌合性质。结论：MDX小鼠非清髓性骨髓细胞移植X射线照射3 Gy后，伴随着嵌合体的形成、抗肌营养不良蛋白合成的稳定生长以及NMJs结构和功能的修复。通过 MNJ 分支的积累和静息膜电位的修复。移植后6个月时，嵌合GFP移植mdx小鼠的BM涂片上所有有核细胞之间的GFP阳性细胞比例为3.3±0.8%，这表明小鼠的嵌合性质。结论：MDX小鼠非清髓性骨髓细胞移植X射线照射3 Gy后，伴随着嵌合体的形成、抗肌营养不良蛋白合成的稳定生长以及NMJs结构和功能的修复。通过 MNJ 分支的积累和静息膜电位的修复。移植后6个月时，嵌合GFP移植mdx小鼠的BM涂片上所有有核细胞之间的GFP阳性细胞比例为3.3±0.8%，这表明小鼠的嵌合性质。结论：MDX小鼠非清髓性骨髓细胞移植X射线照射3 Gy后，伴随着嵌合体的形成、抗肌营养不良蛋白合成的稳定生长以及NMJs结构和功能的修复。