当前合成与系统生物学
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酿酒酵母中蛋白质糖基化工程促进里氏木霉纤维二糖水解酶 I 的胞外活性

徐丽丽、沉宇、侯进、唐洪廷、王成强、鲍晓明

酿酒酵母中的N-糖基化属于高甘露糖型，影响分泌的异源糖蛋白的活性。来自里氏木霉的纤维二糖水解酶 I (Tr-Cel7A) 在酿酒酵母中表达时会发生高糖基化。在本工作中，编码内源甘露糖基转移酶 Och1p、Mnn9p 和 Mnn1p（参与酿酒酵母高尔基体糖蛋白加工）的三个基因被单独或组合破坏，以研究糖基化程度对分泌的 Tr 活性的影响。 -Cel7A。在所有缺失突变体中，重组Tr-Cel7A的糖基化降低，其胞外活性增加。同时删除och1和mnn1对细胞外Tr-Cel7A活性的改善最大。表达α-1后，mnn1Δ/och1Δ菌株中来自里氏木霉的2-甘露糖苷酶（Tr-Mds1p），Tr-Cel7A活性进一步增加，比野生型菌株高320±8%。这种活性的提高不仅归因于更高的分泌产量，还归因于糖基化变化导致的比活性增加。结果表明，酿酒酵母蛋白质糖基化工程是提高Tr-Cel7A胞外活性的有效途径。