免疫组学研究
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使用反向疫苗学鉴定原生动物感染中牛 MHC I 类限制性细胞毒性 T 细胞识别的抗原的新策略

Simon P Graham、Yoshikazu Honda、Roger Pellé、Duncan M Mwangi、E Jane Glew、Etienne P de Villiers、Trushar Shah、Richard Bishop、Pierre van der Bruggen、Vishvanath Nene 和 Evans LN Taracha

背景：针对牛原生动物寄生虫的免疫先前已被证明是通过 MHC I 类限制性 CD8+ 细胞毒性 T 淋巴细胞裂解寄生虫感染的细胞来介导的。据推测，CTL 靶裂殖体抗原的鉴定将有助于亚单位疫苗的开发。我们利用完整基因组序列数据和生物信息学工具来识别编码分泌蛋白或膜锚定蛋白的基因，这些蛋白可能被感染细胞的 MHC I 类分子加工并呈递给 CTL。结果：在由 T. parva 基因组 1 号染色体编码的 986 个预测开放阅读框 (ORF) 中，根据信号肽和/或跨膜螺旋结构域的存在选择了 55 个。36 个选定的 ORF 成功克隆到真核表达载体中，瞬时转染到永生化牛皮肤成纤维细胞中，并使用 T. parva 特异性 CTL 进行体外筛选。使用 IFN-γ ELISpot 测定评估 CTL 对基因产物的识别。通过来自 4 只动物的 T. parva 特异性 CTL 鉴定出编码 174 个氨基酸蛋白质（称为 Tp2）的 525 个碱基对 ORF。这些 CTL 识别并裂解 Tp2 转染的皮肤成纤维细胞，并识别 4 个不同的表位。值得注意的是，在针对子孢子攻击的保护性免疫反应过程中观察到了 Tp2 特异性 CD8+ T 细胞反应。结论：