色谱与分离技术杂志
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开发用于鸟枪法分析人尿液的两性离子亲水液相色谱 (ZIC™ HILIC-MS) 代谢组学方法

Drupad K Trivedi、Huw Jones、Ajit Shah 和 Ray K Iles

尿液是人体新陈代谢的产物，通过肾脏系统排出的大部分代谢产物都被赋予极性，以便溶于水。代谢组学研究中尿液代谢物的分离需要开发与生物化学这一特征相匹配的 HPLC 分离技术。ZIC –HILIC 是在反相无法充分分离的情况下进一步分离此类代谢物的理想选择。代谢组数据必须通过鸟枪式多变量分析进行处理，以筛选数千种分析物及其变量（例如离子强度）。在开发采用质谱 (IT-ToF) 检测的 ZIC-HILIC 分离中，必须最大限度地减少方法学变异性，以便任何鸟枪法数据分析都不会揭示潜在的生物标志物分析物，这些生物标志物分析物是人为的或受到分离和检测技术的不利影响。在此，我们报告了适用于尿液 SIMCA P+ 数据分析的 ZIC-HILIC 质谱方法的开发。分辨率、运行重现性和样品储存温度等变量与 SIMCA P+ 数据分析和质量控制预处理一起进行评估。开发的方法结合了质量控制运行，可预处理并排除对于进一步候选生物标志物研究而言不够稳健的分析物。这意味着在 70% 的 QC 运行（即当天运行的所有样本池）中无法重现的不稳定分析物被排除在外。然而，与储存在 -20°C 的样本相比，在 4°C 储存超过 9 个月的尿液样本将含有代谢物，这些代谢物会改变并产生小分子标记伪影。总之，所开发的方法是 ZIC-HILIC 质谱鸟枪法分析的稳健方法，适用于稳健生物标志物的尿液代谢组发现。