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通过分光光度熔解曲线分析筛选突变/SNP：非电泳、无染料突变检测方法的初步研究

阿里夫·艾哈迈德*、穆罕默德·沙希德、穆罕默德·拉什和赛义德·阿赫塔尔·侯​​赛因

目前可用的突变筛选方法需要荧光标记的探针/染料或电泳或两者，这使得这些方法繁琐、昂贵且耗时。在这里，我们描述了一种不需要探针/染料和电泳的突变/SNP 筛选方法。该技术仅需要 PCR 产物和带帕尔帖的分光光度计。我们通过记录熔化双链体的UV吸光度来监测同源双链体和异源双链体的DNA熔化曲线和转变温度来筛选突变。使用具有珀耳帖效应的分光光度计，以 1℃/min 的加热速率，在 60℃ 至 85℃ 的温度下，以 1℃ 的温度增量，在 260 nm 处测量每个双链体的吸光度。在异源双链体样品中，在 70°C 的转变温度下，紫外吸光度迅速增加。而在同源双链体样品中，则在 75°C 后达到。通过观察异源双链样品与同源双链样品相比转变温度的降低来检测样品中的突变。