希拉·库马里·沙阿
丁香酚对人牙髓细胞成骨分化相关分子标志物表达（如胶原合成）以及两种成骨相关基因碱性磷酸酶（ALP）和骨唾液蛋白（BSP）表达的细胞毒作用使用人牙髓细胞（D824 细胞）进行研究。用丁子香酚以浓度依赖性方式处理细胞，细胞生长和存活率降低。用丁子香酚以浓度依赖性方式处理细胞，[3H]脯氨酸掺入酸不溶性部分的掺入率和I-V型胶原蛋白的合成也降低。在暴露于丁香酚的细胞中，ALP 的 mRNA 表达几乎不受影响，而 BSP 的 mRNA 和蛋白质表达则根据丁香酚的浓度下调。结果表明，由于胶原蛋白合成和 BSP 表达在硬组织形成中起着关键作用，用于牙髓治疗的丁子香酚可能会对据报道存在于人类牙髓组织和牙周膜中的干细胞的正常功能产生细胞毒性作用。丁香酚（4-烯丙基-2-甲氧基苯酚）是丁香油（Eugenia caryophyllate）的主要成分。它被用作香料和调味剂、昆虫引诱剂以及牙科中的局部防腐剂和抗炎镇痛剂。丁子香酚与氧化锌混合成浓稠糊状物，也可在牙科中用作牙周敷料、印模材料和牙髓药物的成分。一些给予牙齿的牙髓药物可以分别穿透牙釉质和牙本质或穿过根尖孔后到达牙髓组织或牙周组织[1]。如果牙髓药物具有细胞毒性，它们可能会干扰人类牙髓组织 [2] 和牙周膜 [3] 中存在的干细胞的正常功能。因此，研究用于牙髓治疗的化学试剂的细胞毒性非常重要。尽管丁子香酚在牙科中具有广泛的临床应用，但它对多种类型的人类细胞具有细胞毒性，包括牙髓细胞[4]、牙龈成纤维细胞[5]和牙周膜成纤维细胞[6]。几乎所有研究中显示的丁子香酚的细胞毒性都是由丁子香酚处理的细胞的生长或活力决定的。很少有研究确定丁子香酚对人牙髓细胞分化相关表型的细胞毒性作用。在本研究中，我们研究了丁香酚对人牙髓细胞成骨分化相关分子标志物如胶原蛋白表达的细胞毒作用。尼泊尔 HIRA kumari Shah Bharatpur 中心医院在人牙髓细胞中合成和表达两种成骨相关基因：碱性磷酸酶 (ALP) 和骨唾液酸蛋白 (BSP)。戈德堡等人。[7] 已经证明，包括胶原蛋白、ALP 和 BSP 在内的成骨相关蛋白是在牙本质原生理和修复过程中合成的。胶原，特别是 I 型，占牙本质基质的 90%。胶原基质不仅提供了促进和发育矿化组织的支架，而且还为 BSP 和牙本质唾液蛋白等非胶原蛋白提供了极好的天然支持[7]。ALP 是牙本质矿化和脱细胞牙骨质形成的重要因素[8]。BSP 是在骨、牙本质和牙髓中发现的非胶原蛋白之一 [9]，并被认为是分化成骨细胞 [10] 和成牙本质细胞样细胞 [11] 的早期标志物。它与 I 型胶原蛋白的特定残基结合 [12]，并作为胶原纤维上羟基磷灰石形成的有效成核剂 [11]。人牙髓细胞（D824细胞）来源于从女性（22岁）的下第三磨牙中提取的牙髓组织，如前所述培养[13]。D824 细胞具有在体外形成矿化结节并在免疫功能低下的小鼠中募集成牙本质细胞样细胞和牙本质样组织的能力[13]。所有实验均使用 D824 细胞进行 10-15 代。丁子香酚（>95% 纯度）购自东京化成工业公司（日本东京），并以 200 mM 溶解于二甲亚砜 (DMSO)（Sigma-Aldrich，东京，日本）中。将溶液用培养基稀释至所需浓度并应用于D824细胞。细胞存活率由丁子香酚处理的细胞的集落形成效率决定。将细胞 (500) 一式三份铺在 60 毫米培养皿上并孵育过夜。将细胞用不同浓度的丁子香酚处理24小时。对照培养物用DMSO培养基孵育。用2ml新鲜培养基洗涤两次后，将细胞孵育13天以形成集落。用无水甲醇固定细胞并用10% Giem sa溶液染色。汤普森等人。[19]。已经证明丁子香酚在分离的大鼠肝细胞中代谢为反应中间体，可能是醌甲基化物，并且丁子香酚在肝细胞中的细胞毒性作用依赖于代谢。在存在大鼠肝脏后线粒体上清液 (PMS) 混合物的情况下，Eu genol 会在叙利亚仓鼠胚胎 (SHE) 细胞中引发计划外的 DNA 合成 [20]。它还会诱导SHE细胞中的染色体畸变，以及染色体畸变的频率 对照培养物用DMSO培养基孵育。用2ml新鲜培养基洗涤两次后，将细胞孵育13天以形成集落。用无水甲醇固定细胞并用10% Giem sa溶液染色。汤普森等人。[19]。已经证明丁子香酚在分离的大鼠肝细胞中代谢为反应中间体，可能是醌甲基化物，并且丁子香酚在肝细胞中的细胞毒性作用依赖于代谢。在存在大鼠肝脏后线粒体上清液 (PMS) 混合物的情况下，Eu genol 会在叙利亚仓鼠胚胎 (SHE) 细胞中引发计划外的 DNA 合成 [20]。它还会诱导SHE细胞中的染色体畸变，以及染色体畸变的频率 对照培养物用DMSO培养基孵育。用2ml新鲜培养基洗涤两次后，将细胞孵育13天以形成集落。用无水甲醇固定细胞并用10% Giem sa溶液染色。汤普森等人。[19]。已经证明丁子香酚在分离的大鼠肝细胞中代谢为反应中间体，可能是醌甲基化物，并且丁子香酚在肝细胞中的细胞毒性作用依赖于代谢。在存在大鼠肝脏后线粒体上清液 (PMS) 混合物的情况下，Eu genol 会在叙利亚仓鼠胚胎 (SHE) 细胞中引发计划外的 DNA 合成 [20]。它还会诱导SHE细胞中的染色体畸变，以及染色体畸变的频率 将细胞孵育13天以形成集落。用无水甲醇固定细胞并用10% Giem sa溶液染色。汤普森等人。[19]。已经证明丁子香酚在分离的大鼠肝细胞中代谢为反应中间体，可能是醌甲基化物，并且丁子香酚在肝细胞中的细胞毒性作用依赖于代谢。在存在大鼠肝脏后线粒体上清液 (PMS) 混合物的情况下，Eu genol 会在叙利亚仓鼠胚胎 (SHE) 细胞中引发计划外的 DNA 合成 [20]。它还会诱导SHE细胞中的染色体畸变，以及染色体畸变的频率 将细胞孵育13天以形成集落。用无水甲醇固定细胞并用10% Giem sa溶液染色。汤普森等人。[19]。已经证明丁子香酚在分离的大鼠肝细胞中代谢为反应中间体，可能是醌甲基化物，并且丁子香酚在肝细胞中的细胞毒性作用依赖于代谢。在存在大鼠肝脏后线粒体上清液 (PMS) 混合物的情况下，Eu genol 会在叙利亚仓鼠胚胎 (SHE) 细胞中引发计划外的 DNA 合成 [20]。它还会诱导SHE细胞中的染色体畸变，以及染色体畸变的频率 在分离的大鼠肝细胞中，丁子香酚在肝细胞中的细胞毒性作用取决于代谢。在存在大鼠肝脏后线粒体上清液 (PMS) 混合物的情况下，Eu genol 会在叙利亚仓鼠胚胎 (SHE) 细胞中引发计划外的 DNA 合成 [20]。它还会诱导SHE细胞中的染色体畸变，以及染色体畸变的频率 在分离的大鼠肝细胞中，丁子香酚在肝细胞中的细胞毒性作用取决于代谢。在存在大鼠肝脏后线粒体上清液 (PMS) 混合物的情况下，Eu genol 会在叙利亚仓鼠胚胎 (SHE) 细胞中引发计划外的 DNA 合成 [20]。它还会诱导SHE细胞中的染色体畸变，以及染色体畸变的频率