蛋白质组学与生物信息学杂志
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使用 LC-HCD-PRM-MS 对早期阿尔茨海默病人血清中的位点特异性 N-糖肽进行大规模筛选和定量分析

潘凌云1,2、林宇1、朱建辉1、张杰1、谭志晶1、David M. Lubman1*

通过质谱法进行糖肽分析可能为发现生物标记物提供重要机会，以帮助早期检测阿尔茨海默病 (AD)。在这项工作中，我们使用 NanoLC-Stepped-HCD-DDAMS/MS 平台和 NanoLC-Stepped-HCD-PRM-MS 平台对新型 N-糖肽生物标志物进行大规模筛选和定量，以早期检测患者的 AD血清。经过胰蛋白酶消化、糖肽富集、分级分离和 NanoLC-Stepped-HCD-DDA-MS 后，分别从轻度认知障碍患者（MCI，AD 的前驱期）和正常对照的 10 μL 血清中回收 N-糖肽/MS 或 NanoLC-Stepped-HCD-PRM-MS 分析。结合使用 Byonic、Byologic 和 Skyline 软件，

Byologic 的差异定量分析表明，与正常对照相比，MCI 中来自 16 种糖蛋白的 29 种 N-糖肽发生了显着变化。此外，对所选 N-糖肽候选物的 HCD-PRM-MS 定量分析证实，来自 CERU 的 EHEGAIYPDN138TTDFQR_HexNAc(4)Hex(5)- Fuc(2)NeuAc(1) 和 VCQDCPLLAPLN156DTR_HexNAc(4)Hex(5)NeuAc(2) ）来自 AHSG 可以显着区分 MCI 和正常对照。这两种糖肽的受试者工作特征曲线下面积 (AUC) 分别为 0.850 (95% CI, 0.66-1.0) 和 0.867 (95% CI, 0.68-1.0) (p<0.05)。结果表明，N-糖肽表达水平的变化为AD的早期检测提供了潜在的血清生物标志物。