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使用克隆的人类基因在中国仓鼠肺细胞突变体中恢复线粒体基因表达

扎基·A·谢里夫和卡罗琳·W·布鲁姆

背景： Gal-32是一种中国仓鼠肺细胞核突变体，由于线粒体蛋白质合成缺陷而无法在半乳糖中生长。由于Gal-32基因的产物未知，因此必须利用表型互补来克隆纠正Gal-32突变的人类基因。

结果：隐性 Gal-32 细胞与 pSV2-neo 质粒 DNA 和来自人类基因组文库的重组 DNA 共转化，该重组 DNA 包含 pSV13 载体中存在的显性人类 Gal+ 基因和氯霉素抗性 (camr) 基因。通过在半乳糖和新霉素类似物G418中生长来选择初级转化体。为了拯救人类Gal+基因，用初级转化子DNA和pCV108粘粒载体构建了基因组文库。camr 基因用于识别具有附近人类序列的克隆。来自两个 camr、Alu 杂交克隆的 DNA 能够将隐性 Gal-32 细胞转化为 Gal+ 表型，并恢复线粒体蛋白质合成。

结论：这些数据证明分离出两个含有人类基因的 pCV108 转化重组克隆，该基因补充了中国仓鼠 Gal-32 突变并恢复了半乳糖代谢。