营养与食品科学杂志
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补充酶基质的竞争性 Elisa 方法验证

苏珊娜·西本尼彻、约翰·迪顿和安娜玛丽亚·昆塔斯

介绍：补充酶在食品工业中的使用越来越多。因此，由于食品制造商的标签原因，还需要对它们进行麸质分析，以提供食品过敏原检测。使用 R5 抗体通过三明治 ELISA 分析麸质。然而，夹心 ELISA 不适合分析片段化麸质，因为检测是基于片段的大小。因此，竞争性 R5 ELISA 已投入使用。当使用竞争性 ELISA 分析不含麸质的酶时，麸质污染的结果非常高，且其原因未知。有人认为酶会破坏测试形式的抗体，因此会获得假阳性结果。
方法：在酶溶液中加入已知浓度的麸质，然后按照制造商的说明使用夹心 ELISA 试剂盒和竞争性 ELISA 试剂盒测试麸质含量。通过将提取温度提高至 100°C 来灭活其他酶样品，并使用夹心和竞争性 ELISA 试剂盒进行测试。
结果：酶中掺入麸质，并用两种不同的 ELISA 进行分析，结果显示夹心 ELISA 出现假阴性结果，而竞争性 ELISA 出现假阳性结果。预孵育实验表明，酶破坏了竞争性 ELISA 中使用的抗体。另一方面，在 100°C 下提取的提取物并未显示出这种效果。
结论：总之，当使用合适的提取方法时，竞争性 ELISA 试剂盒可用于测试发酵产物，例如酶。加标实验清楚地表明，在采用改良提取的竞争性 ELISA 中，麸质的回收率良好，表明煮沸步骤不会影响样品中现有的麸质含量。该方法可用于补充酶以分析此类产品中的麸质含量。