临床毒理学杂志
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国际标准期刊号: 2161-0495
国际标准期刊号: 2161-0495
弗雷·弗朗西斯科·罗梅罗-巴尔加斯、塔利塔·罗查、玛丽亚·爱丽丝·克鲁兹-霍夫林、莉亚·罗德里格斯-西米奥尼、路易斯·阿尔贝托·庞塞-索托和塞尔吉奥·马兰戈尼
在本研究中，对来自蝰蛇 Bothriopsis taeniata（斑点森林坑蝰蛇）毒液的 PLA2 (Btae TX-I) 进行了初步鉴定和生化及生物学表征。通过两个色谱步骤纯化Btae TX-I，即分子排阻色谱法和分析色谱反相HPLC。经 MALDI-TOF 光谱测定证实，其分子量在 SDS-PAGE 上表现为均质单链蛋白，表明分子量为 13889.98 Da。胰蛋白酶肽通过串联质谱法测定，并显示出与其他肌肉毒性 PLA2 的相似性。Btae TX-I 属于 Asp49 PLA2 类，在存在合成底物的情况下具有酶活性，并显示出最小的 S 形行为，在 pH 8.0 和 35–45°C 时达到最大活性。Mn2+ 存在下的 PLA2 活性，无论Ca2+存在或不存在，Mg2+、Cd2+和Zn2+都会被还原，这表明催化位点的排列呈现出Ca2+独有的结构。来自响尾蛇毒液的 Crotalic crotapotins 显着抑制 (p<0.05) Btae TX-I 的酶活性。在离体实验中，Btae TX-I以与其他Bothrops物种类似的方式导致小鸡双腹宫颈制剂中神经肌肉传递的部分阻断。Btae TX-I 还可以抑制外源 KCl (20 mM) 较高浓度 (50 μg) 的挛缩。对与 Btae TX-I 孵育的双腹子宫颈的组织学分析表明，仅最高 Btae TX-I PLA2 剂量（50 μg）就导致几乎 27.4 ± 0.3% 的纤维受损。