植物生物化学与生理学杂志
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光合自养型红氧氧化细胞体外培养过程中显示双相表达的聚糖外切水解酶的表征

Dominguez OV、Peters W、Reinbothe C、Schwarz W、Zverlov V 和 Beck E

像植物叶子一样，光合自养的悬浮培养物Oxybasis rubra Fuentes-Bazan（同义词：Chenopodium rubrum L.）细胞在以 CO2 作为唯一碳源的条件下生长时，会经历不同的发育阶段：4 周的初始细胞分裂期、另外 4 周的稳定期和衰老期。 3-4周），此时细胞衰老并最终死亡。这些阶段通过差异基因表达来反映。从静止细胞的 cDNA 文库中分离出在细胞培养物的静止期强烈表达但在细胞培养物的指数生长期表达较少的基因，并通过 5'-RACE 完成。经同源性分析，初步鉴定该基因为聚糖外切水解酶（Oxybasis rubra聚糖外切水解酶，OrGEH）。在大肠杆菌中异源表达产生了一种优先水解 ß-D-吡喃半乳糖苷的蛋白质，相应的人工对硝基苯基底物的 ß-D-吡喃岩藻糖苷和 ß-D-吡喃葡萄糖苷。该蛋白在细胞壁代谢中的可能功能通过转化本塞姆氏烟草叶片中 GFP 融合蛋白的细胞外定位、分泌途径的 N 末端信号序列以及基因表达对生长素的正响应得到证实。悬浮培养的 OrGEH RNAi 系不仅显示出细胞分裂活性大大降低，而且缺乏稳定期，在此期间细胞通常将其分裂能力加倍。通过分泌途径的 N 末端信号序列和基因表达对生长素的正响应。悬浮培养的 OrGEH RNAi 系不仅显示出细胞分裂活性大大降低，而且缺乏稳定期，在此期间细胞通常将其分裂能力加倍。通过分泌途径的 N 末端信号序列和基因表达对生长素的正响应。悬浮培养的 OrGEH RNAi 系不仅显示出细胞分裂活性大大降低，而且缺乏稳定期，在此期间细胞通常将其分裂能力加倍。生物量通过延伸生长。尽管该蛋白质的天然底物尚不清楚，但我们提出 OrGEH 在细胞分裂和细胞延伸生长过程中处理细胞壁成分的功能。